毛细管电泳——质谱联用和样品富集新手艺的研究及其在蛋白质组学研究中的应用.pdfVIP

摘要 摘要 为了解决蛋白质组学研究中存在的分离与检测网难，本文开展了一些研究并取 得进展，研究卡要集中在以下几个方面。 发展了适合电喷雾质谱(ESI。MS)检测的毛细篱电泳(CE)动态涂层方法， 以提高蛋白酶解肽的分离与鉴定。利用羟丙摹纤维素溶液动态涂层的技术，修饰毛 细管管壁，改善CE分离效率。在不影响质谱检测的条件下，动态涂层毛细筒’电泳 与质谱检测联用有效地提高了对蛋白质的鉴定能力，应用该技术对复杂蛋白质样品 的酶解产物进行了分析鉴定，取得了较为满意的结果。 胰蛋白酶固定石英毛细管酶解一CE或基质辅助激光解吸一飞行时间质谱 的有力工具。本文制作了胰蛋白酶固定的石英毛细管用于快速的的蛋白酶解和肽谱 分析。建立了一种基于溶胶一凝胶包埋聚氯化丙基铵(PDDA)和静电吸附原理的 石英毛细管表面固定化酶的方法，该固定化酶方法具有固定条件温和、酶表观活性 高，可反复再生等优点。蛋白质可以在同一根固定化酶的毛细管内实现酶解和酶解 物的CE分离，仅需2．25 ng的样品就可以完成酶解反应和分离鉴定，样品的消耗 量比常规方法降低了2-3个数量级。胰蛋白酶修饰毛细管可以在24s完成蛋白质的 在44—77％之间。 低丰度蛋白的分析与鉴定是蛋白质组学研究的重点和难点，其中低丰度样品的 富集提高检测水平的关键步骤。为此，我们首次开发了以纳米沸石为吸附载体的样 品富集一MALDI—TOF／MS分析方法。利用纳米沸石比表面积大，表面硅羟基丰 富，具有良好的离子交换性能和丰富可调的表面性质的特点，对极性化合物如多 肽、蛋白质进行浓缩和测定。样品被沸石吸附后无需洗脱，直接与有机基质混合进 行MALDI／MS分析。我们仔细研究了纳米沸石的吸附机制、不同沸石材料对吸附 复丝大学博七后：l{站报肯 摘要 性能和对MALDI效率的影响，从中筛选了两种富集效率高、剥MALDI过程影响 ng／L的多肽，富集效 小的纳米沸石材料S-1和p．60。该方法可以测定浓度低至20 率高达1000倍以上。 此外，还发展了一种适合商品自动切胶一酶解仪使用的聚丙烯酰胺胶的制备及 其应用的方法。通过硅烷化反应在制胶玻板表面引入碳碳双键，使聚丙烯酰胺凝胶 共价键合在制胶玻板的表面。利用玻板的支撑作用实现对凝胶的自动切胶和酶解操 作。 关键词：蛋白质组、多肽、动态涂层、毛细管电泳、质谱、固定化酶、纳米沸 石、样品富集 复雎人学博七后m站报告 4 摘要 Abstract ofnew is andessentialto the urgent promoteproteomics Developmentmethodology andis a tO science．Inthis havefocused study clearlygreatchallengeanalytical paper，we our on thedrawbackof mixture andlowabundant effortsovercome complex separation novelresultsbeen detectionin study．Some have obtained． species proteomics To the andidentificationof separation efficiencycapillaryelectrophoresis—