减毒沙门氏菌为载体的ceacam6联合4-1bbl基因疫苗对实验性大肠癌生长的影响-effects of ceac am 6 combined with 4 - 1 bbl gene vaccine on the growth of experimental colorectal cancer using attenuated salmonella as carrier.docxVIP

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2018-08-14 发布于上海
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减毒沙门氏菌为载体的ceacam6联合4-1bbl基因疫苗对实验性大肠癌生长的影响-effects of ceac am 6 combined with 4 - 1 bbl gene vaccine on the growth of experimental colorectal cancer using attenuated salmonella as carrier

减毒沙门氏菌为载体的CEACAM6联合4-1BBL基因疫苗对实验性大肠癌生长的影响中文摘要第一部分：重组大鼠pIRES-CEACAM6-4-1BBL真核表达载体的构建及功能鉴定目的：构建含pIRES-CEACAM6-4-1BBL的真核表达质粒。方法：从大鼠睾丸中克隆出大鼠CEACAM6基因全长，联合本实验室先前保存的4-1BBL基因，构建质粒并通过脂质体转染COS7细胞，免疫双荧光法检测目的蛋白CEACAM6、4-1BBL的表达。结果：成功构建三个质粒：pIRES-CEACAM6、pIRES -4-1BBL、pIRES-CEACAM6-4-1BBL，并通过脂质体转染COS7细胞，证明重组质粒能表达相应的基因。结论：成功构建了携带大鼠4-1BBL和CEACAM6基因的真核表达质粒。第二部分：含pIRES-CEACAM6-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌构建及功能鉴定目的：构建含pIRES-CEACAM6-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌。方法：将质粒转入鼠伤寒沙门氏菌（LB5000）进行甲基化，利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261，筛选后挑取单克隆扩增进行抽提质粒和PCR鉴定。结果：导入质粒的SL3261经抽提质粒PCR电泳后获得了同原转化质粒相同大小的目的条带。结论：成功构建了含大鼠4-1BBL和CEACAM6基因的真核表达质粒的SL3261疫苗菌。第三部分：含pIRES-CEACAM6-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌对大鼠大肠癌生长的影响目的：探讨减毒沙门氏菌为载体的CEACAM6联合4-1BBL基因疫苗对荷瘤大鼠免疫系统的影响及治疗大肠癌可行性。方法：利用1,2-二甲肼连续18周皮下注射建立大鼠大肠癌模型，第8w、第10w和第12w及第16w根据分组灌服四次含质粒减中文摘要减毒沙门氏菌为载体的CEACAM6联合4-1BBL基因疫苗对实验性大肠癌生长的影响毒沙门氏菌，18周处死大鼠，解剖并观察成瘤数量并进行Dukes分期评判；流式细胞仪检测外周血和和脾脏中细胞表型并利用PHA刺激脾细胞分泌IFN-γ水平，RT-PCR检测脾脏细胞中真核表达载体CMV的转录。结果：对照组平均成瘤数为11.7±2.1 个，明显高于pIRES-CEACAM6/SL3261的5.0±1.4，pIRES-4-1BBL/SL3261 的5.7±1.2 ，pIRES-CEACAM6-4-1BBL /SL3261 的4.3±1.4 ，其中以pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261组最为明显，外周血和脾脏细胞表型检测显示活化T细胞较其它荷瘤组明显增高(P0.05)，脾细胞PHA刺激试验后分泌IFN-γ的能力也明显增强(P0.05)。结论：减毒鼠伤寒沙门氏菌介导和双表达载体将大鼠CEACAM6 和4-1BBL基因体内转染抗原递呈细胞，通过活化T细胞，诱导CD8+细胞毒T细胞（CTL）的产生和细胞因子IFN-γ的分泌，发挥抗肿瘤作用。关键词：4-1BBL基因；CEACAM6基因；减毒沙门氏菌；细胞免疫；大肠癌作者：祝建红指导教师：陈卫昌Effect ofattenuated Salmonella carrying with4-1BB ligandand CEACAM6 inrat colorectalcancermodelsAbstratPartone:Theconstructionandfunctionalidentificationoftherecombinanteukaryoticexpressionvectorcarryingrat4-1BBLandCEACAM6geneObjective:toconstructeukaryoticexpressionvectorwith4-1BBLandCEACAM6 andidentify thefunction.Methods:Afterconstructed arecombinanteukaryoticexpressing plasmidwithCEACAM6and4-1BBL.WetransformeditintoCOS7cells.Fluorescence microscopeobservationandRT-PCRwereusedto detectthe expressionofCEACAM6 and 4-1BBL.Results:Weconstructthreerecombinanteukaryoticexpressingplasmid: pIRES-CEACAM6, pIRES-4-1BBL, pIRES-CEACAM6-4-1BBL, successfully. COS7cells could steadily express 4-1BBL and CEACAM6. Conclusi