减数分裂抑制剂对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力影响-effect of meiosis inhibitor on in vitro maturation and embryonic development of porcine oocytes.docxVIP

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2018-08-14 发布于上海
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减数分裂抑制剂对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力影响-effect of meiosis inhibitor on in vitro maturation and embryonic development of porcine oocytes.docx

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减数分裂抑制剂对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力影响-effect of meiosis inhibitor on in vitro maturation and embryonic development of porcine oocytes

照组 53.43%都有极显著的提高（P0.01）。第二章为研究减数分裂抑制剂cilostamide对猪卵母细胞微丝微管的影响。研究结果发现，GV期和GVBD期，微丝集中在皮质区域； Pro-MI期、MI期和AI-TI期，微丝分布在染色体周围；MII期，微丝随着极体排出细胞外，分布在极体周围。GV期和GVBD期，未观察到微管的存在；Pro-MI期，微管形成，并包裹在染色体周围；MI期，微管行成纺锤体，分布在染色体周围，可观察到垂直或者平行的状态； AI-TI期，微管仍以纺锤体形式存在，位于两团染色体中间；MII期，微管以纺锤体形式分布在染色体周围，同样可观察到垂直或者平行的状态。猪卵母细胞细胞在不同浓度cilostamide抑制培养不同时间，解除抑制培养44h，成熟的MII期卵母细胞，微丝微管形态和染色体排列与对照组无差异。Cilostamide不影响猪卵母细胞细胞骨架。第三章为探索减数分裂抑制剂 cilostamide 对猪体外胚胎发育潜力的影响。猪卵母细胞在含有 20μM cilostamide 的 IVM 培养液中培养 22h，解除抑制剂后再常规培养 44h，成熟的卵母细胞进行孤雌激活和体外受精。孤雌激活试验组卵母细胞的分裂率、囊胚率、囊胚细胞数均略高于对照组，但差异不显著（97.78% vs 92.18%，40.72% vs 35.09%，71.91 vs 64.20，P0.05）。体外受精试验组，卵母细胞的卵裂率、囊胚率均显著高于对照组（73.10% vs 68.34 %，P＜0.05；10.05% vs 8.20 %，P＜0.05）；试验组的囊胚细胞数高于对照组，但差异不显著（71.91 vs 64.20，P0.05）。以上实验结果表明，PDE3 抑制剂 cilostamide 能可逆的抑制猪卵母细胞减数分裂，提高卵母细胞发育能力，对微丝微管形态和染色体排列并未产生不利影响。关键词猪卵母细胞Cilostamide减数分裂微丝微管发育能力EFFECT OF MEIOTIC MITOSIS INHIBITOR ON MATURATION AND DEVELOPMENT OF PROCINE OOCYTESABSTRACTIn vitro maturation of pig oocyte had been studied for decades, but the efficiency of in vitro embryo production and somatic cell nuclear transfer (SCNT) remains limited. Asynchronous of cytoplasmic and nuclear maturation may be one of the main factors affecting the subsequent development competence of procine oocytes. This study aimed to improve the oocyte development capacity regulated by meiotic mitosis Inhibitor.In the first experiment, the optimum effective dose and culture period of times with cilostamide were determined. Oocytes were randomly cultured in the following 4 groups: medium without the inhibitor cilostamide (control) (i) and medium supplemented with cilostamide of 20 μM (ii); 40μM (iii); 60μM (iiii). Oocytes in groups (ii) (iii) and (iiii) were exposed to cilostamide for 11h, 22h and 33h, respectively. GV arrestwas assessed during the in vitro maturation (IVM) at 11 h、22h and 33h.The cilostamide was subsequently removed by transfer of oocytes to a freshIVMmedium.Thenthepercentageofoocytesmaturedtometaphase II were calculat