姜黄素衍生物fm0807下调raf-1mekerk信号转导抑制鼻咽癌增殖作用的研究-curcumin derivative fm 0807 down-regulates raf - 1 mekerk signal transduction and inhibits proliferation of nasopharyngeal carcinoma.docxVIP

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2018-08-14 发布于上海
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姜黄素衍生物fm0807下调raf-1mekerk信号转导抑制鼻咽癌增殖作用的研究-curcumin derivative fm 0807 down-regulates raf - 1 mekerk signal transduction and inhibits proliferation of nasopharyngeal carcinoma.docx

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姜黄素衍生物fm0807下调raf-1mekerk信号转导抑制鼻咽癌增殖作用的研究-curcumin derivative fm 0807 down-regulates raf - 1 mekerk signal transduction and inhibits proliferation of nasopharyngeal carcinoma

目录中文摘要 3ABSTRACT 5英文缩略词表 8前言 9第一部分姜黄素衍生物 FM0807 体外抗鼻咽癌作用 111 材料与方法 112 结果 193 讨论 27第二部分姜黄素衍生物 FM0807 体内抗鼻咽癌作用291 材料与方法292 结果 313 讨论 34参考文献 36致谢40综述 41参考文献 462姜黄素衍生物 FM0807 下调 Raf-1/MEK/ERK 信号转导抑制鼻咽癌增殖作用的研究中文摘要研究背景：鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我国南方常见的头颈部恶性肿瘤。早期首选放射治疗，化疗与手术常作为晚期患者的辅助治疗措施。但是放疗也有一定的局限性，放疗在杀伤癌细胞的同时还损伤了周围正常组织，留下许多后遗症如放射性中耳炎、放射性骨坏死、味觉丧失等，并且许多患者在就诊时已为中晚期，单靠放疗不能取得良好的效果。而常用的化疗药物顺铂、5－FU 等毒副作用大，如肾毒性、耳毒性、神经毒性、心脏毒性等等。因此寻找毒副作用小、疗效好的辅助性治疗方法是目前研究抗鼻咽癌的热点。姜黄素（Curcumin,Cur）是一种来源于植物的多酚类物质，常作为食品添加剂和染料。同时，姜黄素还有广泛的药理作用，如抗炎、抗氧化、抗 HIV 病毒、抗感染及抗肿瘤等，是一种较有潜力的抗癌新药。但是姜黄素水溶性差、生物利用度低的缺点限制了它的使用，福建医科大学药学院对姜黄素进行结构改造，合成了姜黄素衍生物 FM0807。目前姜黄素应用于鼻咽癌的相关报道较少，本研究观察姜黄素衍生物 FM0807 的体内外抗鼻咽癌作用并探讨其机制，为临床应用提供理论依据。研究目的：本课题旨在研究姜黄素衍生物 FM0807 体内外抗鼻咽癌的效应并探讨其作用机制，探索分子靶向治疗鼻咽癌的新方法。研究方法：（1）运用 MTT 法、台盼蓝排染计数法及集落形成试验观察 Cur 及 FM0807 对 NPC 细胞增殖能力的影响。（2）运用集落形成试验和 Western blot 观察 FM0807 对正常表皮细胞 Rhek 增殖能力及 P-ERK1/2 蛋白表达的影响。（3）运用 Hoechest33342/PI 双染、免疫印迹等技术观察 FM0807 对 NPC 细胞周期及凋亡的影响。（4）运用 RT-PCR 与 Western blot 技术分析 FM0807 对 CNE2 细胞 EGFR 与 ERK1/2 的 mRN A 和蛋白水平的影响，并用 Western blot 观察 FM08073能否抑制 EGF 调节的 ERK/MAPK 存活信号。（5）运用免疫共沉淀技术分析对Hsp90 的分子伴侣功能的影响。（6）运用 Western blot 分析 FM0807 对 NPC 细胞 Raf-1/MEK/ERK 通路的影响。（7）建立 CNE2 细胞裸鼠移植瘤模型，观察 FM0807 体内抗癌活性，检测肿瘤生长曲线及瘤重的变化。运用 Western blot 检测 FM0807 对瘤块 Raf-1/MEK/ERK 通路的影响。研究结果：（1）Cur 与 FM0807 均能抑制 NPC 细胞增殖，呈剂量依赖性，集落形成试验还表明 FM0807 的抗癌作用优于其母体化合物 Cur。（2）FM0807 对 Rhek 细胞克隆形成能力的影响较小，且不改变其细胞内 P-ERK1/2 蛋白的表达。（3）FM0807 引起 NPC 细胞周期停滞及细胞凋亡。（4）FM0807 在 mRNA 及蛋白水平均不影响 CNE2 细胞 EGFR 与 ERK1/2 的表达，但能抵抗 EGF 对 P-ERK1/2 的促进作用。（5）FM0807 能够抑制 Hsp90 功能，使其客户蛋白 Raf-1 与 MEK1/2 降解。（6）FM0807 于体外下调 Raf-1/MEK/ERK 通路。（7）FM0807 在裸鼠体内具有一定的抗癌作用，其瘤块生长减慢，瘤重减轻，并且在体内也能下调肿瘤组织 Raf-1/MEK/ERK 通路。结论：（1）FM0807 在体外对正常细胞影响较小，但能够抑制 NPC 细胞增殖，促进其凋亡并诱导细胞周期停滞。（2）FM0807 在体内也具有一定的抗鼻咽癌活性。（3）FM0807 抗鼻咽癌的机制可能与其抑制 Hsp90 的分子伴侣功能有关，通过使 Raf-1 与 MEK1/2 等客户蛋白失去 Hsp90 的保护而被降解，进而下调 Raf-1/MEK/ERK 通路的信号转导。关键词：FM0807 鼻咽癌Hsp90ERK1/24A Curcumin Derivative——FM0807 Suppresses Growth ofNasopharyngeal Carcinoma V