家蝇抗真菌肽maf-1碳端功能结构域128～153肽段maf-1a对小鼠巨噬细胞体外免疫功能的影响-effects of maf - 1a, a 128 - 153 peptide segment of musca domestica antifungal peptide maf - 1 carbon-terminal functional domain, on the immune function of mouse macrophage.docxVIP

家蝇抗真菌肽 MAF-1 碳端功能结构域 128～153 肽段（MAF-1A）对小鼠巨噬细胞体外免疫功能的影响 专业：病原生物学 研究生：姜姗导师：吴建伟 教授摘要：目的：了解不同浓度的 MAF-1A 作用于小鼠腹腔巨噬细胞不同时间后引发 其吞噬功能的变化及其相关细胞因子 NO、IL-6、IL-10、TNF-α含量的变化，从 而为家蝇抗真菌肽 MAF-1 早日开发成为新型药物得以应用于临床提供实验依据。 方法：1.采用中性红法对经 MAF-1A 体外作用后的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能进 行测定 2 . 采用硝酸还原酶法 对经不同浓度 MAF-1A，不同体外作用时间后的小 鼠腹腔巨噬细胞 NO 分泌水平的检测 3. 经 酶 联 免 疫 吸 附 实 验 对经不同浓度 MAF-1A，不同体外作用时间后的小鼠腹腔巨噬细胞 TNF-α、IL-6、IL-10 分泌量 进行检测 4. 采用实时荧光定量 PCR 的方法对经不同浓度 MAF-1A，不同体外 作用 时间 后 的 小 鼠 腹 腔 巨 噬 细 胞 TNF- α 基 因 表 达 量 的 检 测 。 结果 ： 1. 1 0 0 u g / m l 、 5 0 u g / m l 、 2 5 u g / m l MAF-1A 作用 24h 后的小鼠腹腔巨噬细胞吞 噬中性红的能力上升，其吞噬率与对照组相比 P0.05，具有统计学意义。 2. 1 0 0 u g / m l 、 5 0 u g / m l 、 2 5 u g / m l MAF-1A 作用于小鼠腹腔巨噬细胞 6h、12h 后其相关细胞因子 NO 的含量升高，与对照组相比 P0.05。相同浓度组作用小鼠 腹腔巨噬细胞 24h 后，1 0 0 u g / m l 、5 0 u g / m l 浓度组 MAF-1A 能引起 NO 含量的 升高，与对照组相比 P0.05。3. 100ug/ml MAF-1A 作用于小鼠腹腔巨噬细胞 6h 后其相关细胞因子 TNF-α分泌量增加，与对照组相比 P0.05；各浓度组 MAF-1A 作用于小鼠腹腔巨噬细胞 12h 后其相关细胞因子 TNF-α分泌量增加，与对照组 相比 P0.05。100ug/ml 、 50ug/ml MAF-1A 作用于小鼠腹腔巨噬细胞 24h 后其 相关细胞因子 TNF-α分泌量增加，与对照组相比 P0.05。4.100ug/ml 、 50ug/ml 、 25ug/ml MAF-1A 作用于小鼠腹腔巨噬细胞 6h、12h、24h 后其相关 细 胞 因 子 IL-6 、 IL-10 分 泌 量 对 照 组 相 比 无 明 显 变 化 ， P0.05 。 5.100ug/ml MAF-1A 作用于小鼠腹腔巨噬细胞 6h 后，其分泌的细胞因子 TNF-α 基因表达量上调，P0.05。其余条件下，TNF-α的基因表达量与阴性对照组相比 无明显变化，P0.05。结论： 1. 经 100ug/ml 、 50ug/ml 、 2 5 u g / m l MAF-1A作用 24h 后的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力上升，吞噬率增高，即 MAF-1A可活化小鼠腹腔巨噬细胞，调节免疫反应。2. 不同浓度 MAF-1A 作用小鼠腹腔 巨噬细胞不同时间可使小鼠腹腔巨噬细胞相关细胞因子 NO、TNF-α的含量升高， 但 IL-6、IL-10 含量无明显变化；100ug/ml MAF-1A 作用于小鼠腹腔巨噬细胞 6h 后 TNF-α基因表达量上调，其他条件下 TNF-α基因表达量均无明显变化。关键词：家蝇；MAF-1A；小鼠腹腔巨噬细胞；细胞因子；免疫调节前言抗菌肽（Antimicrobial peptide，AMP）是生物天然免疫防御系统的重要组 成部分，是生物体有效的内源性免疫因子，具有抵御外界微生物侵害，清除体内 突变细胞的能力[1]。与传统小分子药物相比，抗菌肽具有抗菌谱广泛、抗菌机理 独特、毒性低、生物与生化多样性丰富、不易使病原生物产生耐药性的特点。不 仅能够杀死细菌、真菌、病毒等微生物，还对疟原虫、杜氏利什曼原虫等寄生虫 以及肿瘤细胞均有毒性；同时还能调节机体免疫功能活性，具备了开发成为新型 药物的潜力[2,3]。在抗菌肽调节机体免疫功能方面的研究显示，抗菌肽可以直接趋化中性粒细 胞、单核细胞、肥大细胞和辅助性 T 细胞；诱导中性粒细胞、单核细胞趋化因子 或细胞因子的基因表达，动员先天性免疫细胞到达感染部位及刺激肥大细胞脱粒 释放组织胺，随后引起血管通透性增加；增加整合素的表达，以促进非调节性吞 噬作用[4]。还能够通过对靶细胞的凋亡、基因转录、巨噬细胞及树突细胞与其它 抗原递呈细胞趋化性的调节作用来调节宿主细胞因子的产生和 B 细胞与 T 细胞的 抗原特异性免疫应答而作用于先天性免疫