急性缺氧条件下乳鼠心肌细胞tnfr1表达特点及sirna调控作用-characteristics of tnf r1 expression and sirna regulation in neonatal rat myocardial cells under acute hypoxia.docx

目录英文缩略词表及中文对照 1中文摘要 2Abstract4前言 6第一部分 急性缺氧条件下乳鼠心肌细胞 TNFR1 表达特点9材料与方法 9结果 20讨论 34参考文献 36第二部分 小分子干扰 RNA 抑制乳鼠心肌细胞 TNFR1 的表达39材料与方法 39结果 41讨论 44参考文献 47综述 49声明 60致谢 61英文缩略词表及中文对照英文缩写英文全称中文名称NRCMNeonatal rat cardiomyocytes乳鼠心肌细胞TNFR1Tumor necrosis factor-α receptor 1肿瘤坏死因子受体 1TACETNFα converting enzymeTNF-α 转换酶MAP3kmitogen-activation protein kinase丝裂原激活蛋白激酶p38MAPKp38 mitogen-activated protein kinases分子量为 38KD 的酪氨酸磷酸化蛋白激酶ASK1Apoptosis signal-regulating kinase 1细胞凋亡信号调解激酶 JNKc-Jun NH2-terminal kinasec-Jun 氨基末端激酶 PKCprotein kinase C蛋白激酶 CSOCSSuppressor of cytokine signaling细胞因子信号抑制物CamKCalcium/calmodulin-dependent protein kinase钙调素依赖性蛋白激酶MMPMatrix metalloproteinase基质金属蛋白酶ROSreactive oxygen species活性氧簇急性缺氧条件下乳鼠心肌细胞 TNFR1 表达特点及siRNA 调控作用 硕士研究生：刘立新 指导老师：陈志坚教授中文摘要第一部分 急性缺氧条件下乳鼠心肌细胞 TNFR1 表达特点 目的：探讨急性缺氧条件下，乳鼠心肌细胞（NRCM）肿瘤坏死因子受体 1（TNFR1）表达变化情况。方法及结果：培养原代乳鼠心肌细胞，应用 Na2S2O4 作为氧清除剂，模拟单 个心肌细胞缺氧模型；根据血气分析结果，在培养基中加入不同浓度的 Na2S2O4， 造成心肌细胞轻、中、重度不同程度缺氧，利用 RT-PCR、Western-blot 和 confocal 分别检测心肌细胞 TNFR1 的表达变化情况。结果显示，在缺氧急性期(3h 内)， 随着缺氧程度的加重和缺氧时间的延长，心肌细胞 TNFR1 表达减少，且重度缺 氧早期即可出现 TNFR1 表达明显减少，而轻度缺氧时，TNFR1 表达量下降相对 缓慢。结论：在急性缺氧条件下(缺氧 3h 内)，乳鼠心肌细胞 TNFR1 表达减少。关键词：肿瘤坏死因子受体 1；缺氧；乳鼠心肌细胞第二部分 小分子干扰 RNA 抑制乳鼠心肌细胞 TNFR1 的表达 目的：研究 siRNA 对乳鼠心肌细胞（NRCM）肿瘤坏死因子受体 1（TNFR1） 基因沉默作用。方法及结果：根据大鼠基因序列设计，化学合成 3 条干扰 TNFR1 基因的 siRNA 及 1 条阴性对照 siRNA，以 Cy3 荧光标记，以 Lipofectamine 2000（Invitrogen， 美国）介导转染 NRCM，用 RT-PCR 和 Western-blot 分别检测 TNFR1 基因在 mRNA和蛋白水平的改变，验证所设计的 siRNA 的抑制效应。以 Lipofectamine 2000 介导转染 NRCM，转染效率大于 30%。起始于大鼠 TNFR1 基因 614 位点的 siRNA有明显的抑制效应，在基因水平下降 76.2%（P 0.05），蛋白水平下降了 75.4%（P 0.05）。结论：起始于 614 位点的 siRNA 对乳鼠心肌细胞 TNFR1 有明显的抑制效应。关键词： siRNA；肿瘤坏死因子受体 1；乳鼠心肌细胞TNFR1 expression characteristics under acute hypoxia and siRNA regulation of neonatal rat cardiomyocytesMaster Candidate: Liu Lixin Tutor Professor :Chen ZhijianAbstractPart OneTNFR1 expression characteristics under acute hypoxia of neonatal rat cardiomyocytesObjective: Investigate under acute hypoxia, the TNFR1 expression changes of neonatal r