姜黄素通过上调mir-7抑制人胰腺癌细胞生长的机制研究-mechanism of curcumin inhibiting growth of human pancreatic cancer cells by up-regulating mir - 7.docxVIP

姜黄素通过上调 miR-7 抑制人胰腺癌细胞生长的机制研究摘要背景和目的:越来越多的证据显示，天然化合物姜黄素（curcumin）在肿瘤细胞的增殖、凋 亡、迁移、侵袭和转移中起着至关重要的作用，并参与调节多种细胞信号传导途 径。大量研究已证实，miRNA 能够负向调控靶基因的表达，在肿瘤发生发展中发 挥着抑癌基因和癌基因的功能。在本项研究中，我们将探讨姜黄素作用胰腺癌细 胞后，对其生长、迁移和侵袭影响的作用和可能的分子机制。方法：1.以人胰腺癌 AsPC-1 和 BxPC-3 细胞为试验对象，分别采用 MTT 增殖，Transwell 试验，Annexin V-FITC/PI 双染等试验检测姜黄素抑制细胞的增殖、迁移侵袭及诱 导细胞凋亡的作用。2.应用实时定量 PCR 法检测姜黄素对两株细胞中 miR-7 表达 的影响。3.通过转染 miR-7 mimics 上调细胞内 miR-7 的表达，或者转染 miR-7 inhibitor 下调细胞内 miR-7 表达，并结合姜黄素处理细胞，检测姜黄素通过上调 miR-7 抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭和诱导凋亡的作用。其中上调 miR-7 的实验分 组分别为对照组、姜黄素处理组、miR-7 mimics 转染组、姜黄素与 miR-7 mimics 两者共同处理组。下调 miR-7 表达的实验分组分别为：对照组、姜黄素处理组、 miR-7 inhibitor 转染组、姜黄素与 miR-7 inhibitor 共同处理组。4.通过转染 miR-7 mimics 以及 miR-7 inhibitor，结合姜黄素处理细胞，实验分组同上，检测姜黄素通 过上调 miR-7 影响细胞内下游靶蛋白 SET8 的表达。结果：1.不同浓度姜黄素分别作用人胰腺癌 AsPC-1 和 BxPC-3 细胞后，与对照组相比， 细胞增殖、迁移和侵袭能力明显降低（P0.05），且呈现浓度依赖性。提示姜黄素 能够抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。 2.不同浓度姜黄素分别作用人胰腺癌 AsPC-1 和 BxPC-3 细胞后，细胞凋亡率明显 高于对照组，呈现剂量依赖关系，说明姜黄素具有诱导胰腺癌细胞凋亡的作用。 3.姜黄素作用胰腺癌细胞 48 小时后，qRT-PCR 结果表明，姜黄素处理组细胞内miR-7 表达明显高于对照组（P0.05），并呈现浓度依赖关系提示姜黄素具有上调胰腺癌细胞中 miR-7 表达的作用。4.上调 miR-7 表达的实验分组结果显示：与对照组相比，姜黄素处理组和 miR-7 mimics 转染组均能抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭，诱导凋亡，且两者共同处理组效 果更加明显（P0.05）。同样，下调 miR-7 表达的实验分组结果显示：与对照组 相比，miR-7 inhibitor 转染组促进了胰腺癌细胞增殖和侵袭能力，并且抑制凋亡， 两者共同处理组结果介于姜黄素组和 miR-7 inhibitor 组之间。以上结果说明了姜黄 素通过上调 miR-7 的表达抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭能力，促进细胞的凋亡。 5.上调 miR-7 表达的实验分组结果显示：与对照组相比，姜黄素处理组和 miR-7 mimics 转染组均下调了胰腺癌细胞内 miR-7 下游靶蛋白 SET8 的表达，且两者共 同处理组效果更加显著。同样，下调 miR-7 表达的实验分组结果显示：miR-7 inhibitor 转染组则上调了胰腺癌细胞内 SET8 蛋白的表达，姜黄素处理组下调了 SET8 蛋白的表达，两者共同处理组则介于两者之间。以上结果说明姜黄素通过上 调胰腺癌细胞中 miR-7 的表达下调 SET8 蛋白的表达。结论：.姜黄素能够抑制人胰腺癌 AsPC-1 和 BxPC-3 细胞增殖、迁移和侵袭能力，促进 细胞凋亡。.姜黄素能够通过上调 miR-7 的表达抑制人胰腺癌 AsPC-1 和 BxPC-3 细胞增殖和 侵袭能力，促进细胞凋亡，并下调下游靶蛋白 SET8 的表达。关键词：姜黄素；miR-7；SET8；凋亡；人胰腺癌细胞Curcumin Inhibits Cell Growth and Invasion Through Up-regulation of miR-7 in Pancreatic Cancer CellsAbstractBackground and Objective: Accumulating evidence has revealed that a natural compound curcumin has been shown to inhibit growth and metastasis in a variety of human cancers including pancreatic cancer (