耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶检测及同源性分析.docVIP

——————————————————————————————————————————————— 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶检测及同源性分析 ·154· ◇临床医学研究◇ 安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2012Feb；47（2） 1，21 芮晓艳，胡杰贵3 摘要目的了解临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌 采用Mi- （IRAB）碳青霉烯酶的基因型及同源性。方法 重复计入。 1．2试剂与主要仪器 croScanWalkAway-40微生物分析仪进行菌株鉴定和药敏试23、OXA-24、OXA-51、验，聚合酶链反应（PCR）检测OXA-OXA-58组碳青霉烯酶基因型，肠杆菌科重复序列PCR（ERIC-PCR）检测耐药基因阳性菌株的同源性。结果 64 株IRAB均为多重耐药菌株，其中10株（15.6%）为泛耐药51株（79.7%）blaOXA-23阳性，4株（6.3%）blaOXA-58阳菌株， 57株（89.1%）blaOXA-66/blaOXA-51组阳性。ERIC-PCR结果性， 显示blaOXA-23阳性菌株中47株为同一基因谱。结论菌株间可能存在克隆传播。的重要机制，关键词 鲍曼不动杆菌；碳青霉烯酶；同源性 R378.99；R978.11 中图分类号 产 OXA-23型碳青霉烯酶是我院鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药 头孢哌酮/舒巴坦和米诺环 10×PCR素药敏纸片购自英国Oxiod公司；Taq酶、 dNTPMixture购自大连宝生物公司；PCR引Buffer、 物由上海生工生物工程有限公司合成；DNA扩增仪购自德国Biometra公司；凝胶成像系统购自上海天能公司。 1．3菌株鉴定和药敏试验 采用MiroScanWalk-Away-40全自动微生物分析仪及其配套的NegativeComboPanelTgpe31（革兰氏阴性复合板31）进行细 头孢哌酮/舒巴坦和米诺环素药菌鉴定及药敏试验， 敏试验为纸片扩散法。质控菌株为铜绿假单胞菌 ATCC27853，大肠埃希菌ATCC25922，药敏试验判断标准CLSI2008。 1．4碳青霉烯酶基因检测及测序 采用煮沸法提 取细菌总DNA。PCR反应体系均为50μl，包括5 10×PCRBuffer5μl，Taq酶（5U/μl）0.25μl模板， 文献标识码A文章编号1000－1492（2012）02－0154－04 Ab）是鲍曼不动杆菌（Acinetobacterbaumannii， 非发酵的需氧的革兰阴性杆菌，广泛的分布在医院是引起医院感染的重要的条件致病菌，尤其环境中， 是重症监护病房，可引起多种院内感染，包括败血症、肺炎、心内膜炎、脑膜炎、伤口的感染或泌尿系统 ［1］ Ab对多种抗生素天然耐药，碳青霉烯类的感染， 对不动杆菌属有较好的抗菌活性，是治疗不动杆菌 属严重感染的首选药物，近年来Ab对碳青霉烯类的耐药率呈上升趋势，给临床治疗带来很大的困难。本研究收集临床分离耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌（imipenemresistantAcinetobacterbaumannii，IRAB），检测碳青霉烯酶基因型及菌株间同源性。11．1 材料与方法 dNTPMixture4μl，μl，上、下游引物（20μmol/L）各 1μl，双蒸水33.75μl，各种靶基因引物序列和反应 ［2－3］ 。PCR扩增产物经1.5%的琼脂糖条件见表1 凝胶电泳，溴化乙锭染色，用凝胶成像系统观察结 果。PCR阳性产物委托上海生工生物工程有限公司双向测序，测序结果在GenBank中比对。 表1 引物名称blaOXA-23-like-F-RblaOXA-24-like-F-RFblaOXA-51-like--R blaOXA-58-like-F -R 靶基因PCR引物序列引物序列（5#39;-3#39;） GATGTGTCATAGTATTCGTCGTCACAACAACTAAAAGCACTGGGTTAGTTGGCCCCCTTAAAAGTTGAGCGAAAAGGGGATTTAATGCTTTGATCGGCCTTGTGGATTGCACTTCATCTTGGAAGTATTGGGGCTTGTGCTGCCCCTCTGCGCTCTACATAC 59