2 酶学与酶工程 第二章 学生【PPT】.pptVIP

* pH影响的机理： 1）pH影响E活性中心及附近有关基团的解 离，使之易或不易与S 结合； 2）pH影响S的极性基团，从而影响这些基 团与E的结合； 3）过酸、过碱可使酶变性失活。 5.激活剂和抑制剂 凡能增高酶活性的物质，称为酶的激活剂 凡能降低或抑制酶活性但并不使酶变性的物质称为酶的抑制剂 1）酶的激活剂 * 无机离子 中等大小的有机分子 蛋白质 金属离子: 无机阴离子: 氢离子 K+、Na+、Ca2+、Mg2+ 、Zn2+ 等。 Cl-等。 某些还原剂：GSH、Cys、Vc 金属螯合剂 * 2）酶的抑制剂 抑制作用与抑制剂（inhibition and inhibitor） 酶分子中的必需基团的性质受到某种化学物质的影响而改变，导致酶活性的降低，甚至丧失，但并未引起酶变性的作用称抑制作用。 * 可逆抑制(Reversible Inhibition) 通常以非共价键与酶和（或）酶-底物复合物可逆性结合，使酶活性降低或消失。采用透析或超滤等物理方法可将抑制剂除去，使酶恢复活性。 类型： 竞争性抑制（competitive inhibition） 非竞争抑制（ noncompetitive inhibition） * ki2 ki1 竞争性抑制 * 例: 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用 * 非竞争性抑制 Fig. Noncompetitive inhibition * 不可逆抑制作用（irreversible inhibition) 抑制剂以共价键和酶分子上必需基团结合（牢固结合），使酶活性降低或丧失，这种抑制剂不能用透析、超滤等物理方法解除抑制作用。 不可逆抑制 专一性的不可逆抑制 非专一性的不可逆抑制 第二节酶在生物体内的几种存在方式 * 一、单体酶、寡聚酶、多酶复合体 1. 酶蛋白是一条具有三级结构的多肽链，相对分子量为13000-35000，不能再解离成更小的组成单位 2.寡聚酶具有四级结构，是由两个或两个以上的亚基组成的酶，这些亚基可以是相同的，也可以是不同的 3.多酶复合体 多酶复合体是指几个酶联合而成的络合物，其中酶以非共价键彼此嵌合在一起。一般由2－6个功能相关的酶组成，这样更有利于生化反应的连续进行，以提高酶的催化效率，同时也便于机体对酶的调控。 1）多酶复合体组成成分的结合强度可能差别很大 2）在催化活性上没有直接相关的酶也可以组成多酶复合体 3）在细胞内各种多酶复合物还可能通过和细胞膜或细胞器结合在一起。从而通过相互邻近组成高效的物质和能量代谢系统。 * 二、同工酶 同工酶具有多种生物学功能： 1）同工酶作为遗传标志已广泛被遗传学家用于遗传分析的研究。 2）同工酶和个体发育及组织分化密切相关 3）同工酶与代谢调节 4）同工酶与癌基因的表达 5）同工酶分析法在农业上已开始用于优势杂交组合的预测 6）临床上可作为疾病的诊断指标。 * * 三、别构酶和修饰酶 1.别构酶(allesteric enzyme) 别构酶的特点和性质 概念：具有别构调节作用的酶称作别构酶。 许多寡聚酶具有调节亚基，催化亚基只结合底物，调节亚基结合调节剂，因此称别构酶，是调节代谢的重要酶。 2.修饰酶 1．修饰酶的类型 2．修饰酶的特点 (1)绝大多数修饰酶具有无活性／有活性(或低活性／高活性)两种形式 (2)耗能少 (3)效率高 四、结构酶和诱导酶 五、胞内酶和胞外酶 * 一、酶活力单位 酶活力（enzyme activity, 也称酶活性） 酶催化反应的能力，酶活力用在一定条件下它所催化的某一化学反应的反应速度来表示。 酶的活力单位（IU, active unit） 1 IU：指在最适反应条件下，1分钟内催化1?mol底物转化为产物所需的酶量。 酶的比活力（specific activity） 指每mg蛋白质所具有的酶活力，一般用 U/mg蛋白质来表示 。 第三节 酶活力测定 * 二、酶活力的测定方法 酶活力测定时条件的选择： 1．选择合适的化学反应及检测指标 2．底物浓度的选择 3．其他条件的选择 pH，温度，缓冲液，辅助因子或辅酶，激活剂，抑制剂 * * 分光光度法： 荧光法： 电化学法： 放射性同位素法： 如果酶促反应的产物具有光（可见光、紫外光）吸收性质，或反应产物进行一定反应后具有光吸收性质。方便，常用。 底物或产物具有荧光性质。灵敏度高。 反应过程中有pH的变化，可以用pH计检测，可以用滴定法测定。方便，常用。 用放射性同位素标记的底