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2018-06-06 发布于浙江
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SVV基因修饰的血管内皮细胞生物学变化研究

SVV基因修饰的血管内皮细胞生物学变化研究重庆医科大学附属第一医院血管外科王学虎赵渝血管疾病发病率升高：动脉粥样硬化在50～60岁为77.3％，61～70岁为87％，70岁以上为100％目前小血管治疗效果较差：药物仅为控制疾病加重，血管移植在下肢腘动脉以远，通畅率极低。内皮细胞是保证血管长期通畅和促进血管生长的关键但是，自体内皮细胞获得困难且生长缓慢；异体细胞易受免疫损伤而出现细胞凋亡 Survivin（SVV）是目前已知最强的凋亡抑制因子我们前期研究发现：1、SVV基因多个通路调控肿瘤细胞生物学活性； 2. VEGF可以通过上调SVV产生对内皮细胞的生长促进作用研究目的：明确SVV基因对内皮细胞凋亡、增殖及迁移等作用及机制，探讨SVV基因的调控下的内皮细胞能为小动脉保持通畅及血管再生寻找解决方法腺病毒载体构建及转染：成功构建了过表达大鼠SVV基因的腺病毒载体，滴度为 2.3 ×1010 PFU/ml，DNA测序确定表达正确。在荧光显微镜下观察腺病毒转染后绿色荧光的情况，并用流式细胞学测定荧光率计算腺病毒的感染效率。MOI在150时转染率达到（98±0.48）% SVV核酸表达：RT-PCR检测核酸水平的含量差异。 SVV蛋白表达：通过western-blot检测蛋白表达差异流式细胞学对凋亡检测结果显示，SVV可使内皮细胞凋亡率明显下降。在SVV基因对内皮细胞凋亡通路的调控：采用抗FAS抗体诱导凋亡，检测细胞凋亡经典信号通路中凋亡蛋白caspase的表达变化。结果提示，过表达SVV的内皮细胞中caspase 3、caspase7、caspase 9的表达明显下降。 SVV基因在促进内皮细胞增殖：流式细胞学分析结果提示转染SVV后，细胞周期发生了明显的变化，过表达的SVV基因能促进细胞周期从G2/M期向G1/S期转换，从而促进细胞的增殖。后续研究： SVV对细胞增殖相关蛋白及周期蛋白的影响； SVV对内皮细胞迁移能力的影响； SVV在体内对微血管生长的影响；谢谢！ * * 实验组对照组 *