WNT抑制因子-1基因启动子区甲基化状态.pptVIP

* WNT抑制因子-1基因启动子区甲基化状态 与贲门腺癌发生的关系 河北医科大学第四医院暨河北省肿瘤医院肿瘤研究所 郭艳丽 中国贲门癌的界定标准 ( 1991年 ) 瘤体发生在齿状线下约 2.0 CM 流行病学调查表明，在上消化道 肿瘤高发区，食管癌及远端胃癌 的发病呈下降趋势，而贲门癌的 发病则不断上升。因此，对贲门 癌的病因学研究不容忽视。 贲门腺癌(Gastric cardic adnocar- cinoma,GCA)是常见的上消化道恶 性肿瘤，过去在肿瘤登记中经常被 当作食管癌或胃癌，近些年由于病 理诊断及内镜技术的进步已将其独 立了出来。 环境与遗传因素共同作用 甲基化 抑癌基因 的失活 抑癌基因的失活 和原癌基因的激 活的基因改变积 累的遗传学和表 遗传学的疾病 癌症 遗传因素 和表观遗 传因素 并非所有暴露 个体均患病 亚硝胺类化合物 吸烟、饮酒 营养缺乏 霉菌感染 贲门癌 Wif-1基因作为候选抑癌基因是Wnt/β-catenin信号传导通路的拮抗基因之一，研究发现该通路的异常激活与多种肿瘤的发生密切相关。 拮抗基因的表达下调可减弱对通路的抑制作用，使通路活化，促进下游多种靶基因过度表达，进而参与肿瘤的发生。 VEGF-C/VEGF-D是这条通路的下游靶基因，两者高度同源，可促进肿瘤组织血管及淋巴管的生成。 经典Wnt 信号转导通路 检测贲门腺癌中Wnt抑制因子-1（Wif-1）基因启动子区甲基化状态及通路中心因子β-catenin，下游靶基因VEGF-C、VEGF -D蛋白表达情况，探讨其与贲门癌发生的关系及可能的作用机制。 目的 材料与方法 研究对象 河北医科大学第四医院2004-2006年的 贲门癌手术患者，共94例，其中男性78 例，女性16例，年龄范围37-79岁，平均 年龄53.8岁。每例患者均取贲门癌原发灶 及相应残端正常粘膜组织。 实验方法 甲基化特异性PCR（MSP） RT-PCR检测 免疫组化SP法 Sense primer (5-3) Antisense primer (5-3) Annealing temperatures Product size (bp) MSP primers Methylated CGTTTTATTGGGCGTATCGT ACTAACGCGAACGAAATACGA 55.2℃ 145 Unmethylated GGGTGTTTTATTGGGTGTATTGT AAAAAAACTAACACAAACAAAATACAAAC 60.5 ℃ 154 RT-PCR primers Wif-1 TCTGTTCAAAAGCCTGTCTGC CCTTTTATTGCAGTGTCTTCCA 57.4 ℃ 111 GAPDH GGGAAACTGTGGCGTGAT GTGGTCGTTGAGGGCAAT 57.4 ℃ 354 Table 1 primer sequence and PCR conditions 贲门腺癌中Wif-1基因启动子区甲基化状态分析 94例贲门腺癌及94例相应正常粘膜组织均成功进行了MSP检测，结果共有三种情况： (1)完全甲基化； (2)不完全甲基化； (3)未发生甲基化。 结果一 Methylation analysis of Wif-1 gene in tumor tissue (T) and corresponding normal tissue (N). MA: Maker; N: normal tissue; T: tumor tissue; M: Methylated genes; U: Unmethylated genes. Cases 1: tumor-specific methylation; Case 2: the tumor is hemi-methylated, whereas the corresponding normal tissue is unmethylated; Case3: both tumor and corresponding normal tissue are hemi-methylated; Case 4: both tumor and corresponding normal tissue are unmethylated. 将不完全甲基化状态计入甲基化进行统计， 则贲门癌组织的甲基化率为61.7%（58/94），而相应正常粘膜仅有32例检测到甲基化，占总例数的34.0%，癌组织中Wif-1基因的甲基化率显著高于正常黏膜组织（P0.05）。 Wif-1基因高甲基化可能与贲门癌的发生有关 提示 Group N Wif-1 χ2 P M U Histological gra