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2010-03 中国药典2010版药品微生物检查指导原则 我国微生物检查发展概况 表 防腐剂抗菌效力标准 1 类 供 试 品 细 菌 7天菌数下降不少于1.0 lg，14天菌数下降 不少于3.0 lg ，第14天到28天菌数不增加。 真 菌 与初始值比，到7、14、28天菌数均不增加。 2 类供 试 品 细 菌 14天菌数下降不少于2.0 lg ， 14天到28天菌数 不增加。 真 菌 与初始值比，到14、28天菌数均不增加。 3 类 供 试 品 细 菌 14天菌数下降不少于1.0 lg ， 14天到28天菌数均不增加。 真 菌 与初始值比，14、28天菌数均不增加。 4 类 供 试 品 细菌，真 菌 与初始值比，14、28天菌数均不增长。 注：1、表中“不增加”是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量不超过0.5 lg。 2、0时菌数 供试品加入试验菌，摇匀，立即取样检查，培养，计数，为0时 ，即初始值。 替代方法的一般要求 在以替代方法对样品检验的适用性进行验证前，必须证明所选用的替代方法具有方法适用性，即表明在不含样品的情况下，替代方法的专属性、精密度、检测限等参数。 确认方法的适用性后，用样品按上表规定的参数进行验证。验证至少用2个批号的样品，每批样品每个菌应至少平行进行三次独立实验。 参数验证的菌种应包括培养基适用性检查规定的菌种，必要时，还应根据替代方法及样品的特性增加相应的菌种。 定性检验的方法验证 微生物限度检查法应用指导原则 药品微生物实验室规范指导原则 工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） 中国食品发酵工业科学研究所 抗生素菌种保藏管理中心（CACC） 中国医学科学院医用生物技术研究所 四川抗生素研究所 华北制药厂抗生素研究所 兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC） 农业部兽医药品监察所 林业微生物菌种保藏管理中心（CFCC） 中国林业科学院 专利微生物菌种保藏管理中心（ACCC） 武汉大学 国外的菌种保藏机构 世界菌种保藏联合会（WFCC） 美国标准菌种收藏所（ATCC） 美国农业部北部地区研究实验室（NRRL） 英国 国立标准菌种收藏所（NCTC） 英国 国际真菌研究所（CMI） 荷兰真菌中心保藏所（CBS） 日本微生物菌种保藏联合会（JFCC） 标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商提供的说明或按验证的方法进行。 标准储备菌株—从国内、外菌种收藏机构获得的标准菌株经复活并在适宜的培养基中生长后,既为标准储备菌株。 2、检测限：是指在替代方法设定的检验条件 下，样品中能被检出的微生物的最低数量 ，该数量是指在稀释或培养之前初始样品所含有的微生物数量，而不是指检验过程中某一环节的供试液中所含有的微生物数量 。 验证的关键是确定接种菌的最低数量（每单位不超过5cfu），分别用药典方法和替代方法对该菌进行检验，比较两种方法的差异。与国外药典规定相同，要求试验菌的接种量应能够在采用药典方法检验时，有50％的检出率。 检测限验证至少应重复进行5次。 3、重现性：是指相同的样品在正常的实验条件（如实验场所、实验人员、仪器、试剂的批次等）发生变化时，所得检验结果的精密度 。反映了微生物检验方法在检验结果上抵抗操作和环境变化的能力 。 验证的关键是使接种菌的量在检测限以上，评价验证结果时，应排除样品均一性的影响 4、耐用性：是指当方法参数有小的刻意变化时，检验结果不受影响的能力，为方法正常使用时的可靠性提供依据 。 对替代方法进行耐用性评价，确定方法操作的关键注意点。 在开展了上述评价后，可以不必比较替代方法的耐用性与药典方法的差异。 定量检验的方法验证 1、准确度：是指替代方法的检验结果与药典方法检验结果的一致程度。准确度的确认应在检验的范围内。通常用微生物的回收率（％）来表示准确度 。 验证的菌浓度应该在检测范围内，一般应选择能够准确计数的最高浓度，系列稀释至较低浓度，并且至少应该有5种浓度，每种浓度重复检验5次。 替代方法的回收率应该达到70％以上。 当替代方法并不依赖微生