sonic hedgehog通过microrna92a转录后调控klf4在内皮功能中的作用机制研究-study on the mechanism of sonichedgehog regulating kl f4 in endothelial function after transcription by microrna 92a.docxVIP

英汉缩略语名词对照英文缩写英文名称中文名称HUVECHuman Umbilical Vein Endothelial Cell人脐静脉内皮细胞SHHSonic Hedgehog音猥因子IHHIndian Hedgehog印第安刺猬基因DHHDesert Hedgehog沙漠刺猬基因PtchPatched membrane receptorPtch 跨膜蛋白受体SmoSmoothenedtransmembrane proteinSmo 跨膜蛋白受体KLF4Krüppel-Like Factor-4Krüppel 样因子 43’UTR3’-untranslated region3’端非编码区DNADeoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸RNARibonucleic acid核糖核酸miRNAMicroRNA微小核糖核酸mRNAMessenger RNA信使核糖核酸siRNAsmall interfering RNA小片段干扰核糖核酸RTReverse Tanscription逆转录PCRPolymerase Chain Reaction聚合酶链式反应RT-PCRReverse Tanscription Polymerase Chain Reaction逆转录聚合酶链式反应hHour小时minMinute分钟sSecond秒bpBase pair碱基对rpmRevolutions per minute转/分PIPropidium iodide碘化丙锭DEPCDiethy pyrocarbonate氧二甲酸二乙酯1PBSPhosphate buffered磷酸盐缓冲液TweenPolysorbate聚山梨酯2Sonic Hedgehog 通过 microRNA-92a 转录后调控 KLF4在内皮功能中的作用机制研究摘要背景 Shh（Sonic hedgehog）信号通路作用于动脉粥样硬化病变。 有研究表明 microRNA-92a 对于维持内皮功能有重要作用。在人髓母细 胞瘤中，Shh 被证实可以调控 microRNA-92a 的表达。在内皮细胞中， Shh 信号通路是否能够调节内皮功能仍未见报道。本研究的目的是探讨 Shh 信号通路在调节内皮细胞功能中的作用机制。方 法 与 结 果 在 人 脐 静 脉 内 皮 细 胞 （ human umbilical vein endothelial cells ， HUVECs) 中 ， 过 表 达 Shh 信 号 通 路 可 以 上 调 microRNA-92a 的表达水平,下调 KLF4（krüppel-like factor-4）的表达水 平。反之，敲低 Shh 信号通路可以使 microRNA-92a 的表达水平下降和 KLF4 的表达水平升高，说明了 Shh 信号通路可以调控 KLF4 的表达。 计算机软件预测到在 KLF4 的 3’端非编码区（3’-untranslated region, 3’UTR）存在两个高度保守的 microRNA-92a 的结合位点。我们应用 荧光素酶报告基因证实了在 microRNA-92a 上存在与 KLF4 的 3’端非 编码区序列结合的特殊结合位点。下调 microRNA-92a 可以使 KLF4， 内皮型一氧化氮合酶（eNOS）以及血栓弹力蛋白在蛋白及 mRNA 水平 的表达均升高。另外，我们把 Shh-cDNA 和 anti-miR-92a 共转染到 HUVEC 中，与只转染 Shh-cDNA 的细胞相比，KLF4 的蛋白表达水平 恢复到正常 HUVECs 中 KLF4 的表达水平。本研究结果证实了上调 Shh3信号通路可以上调 microRNA-92a，microRNA-92a 转录后调控 KLF4的表达,从而影响内皮细胞的功能。结论 本研究证实了 Shh 信号通路可以通过 microRNA-92a 转录后 调控 KLF4 在内皮功能中的作用。关键词 Shh, KLF4, miR-92a, 动脉粥样硬化, 内皮功能4DOWN-REGULATION OF KRüPPEL-LIKE FACTOR-4 BY MICRORNA-92A IS CRITICAL FOR REGULATION OF ENDOTHELIAL FUNCTION BY SONIC HEDGEHOG SIGNALINGABSTRACTBackground Sonic hedgehog (Shh) signaling was implicated in arteriosclerosis. MicroRNA-92a (miRNA -92a) was demonstrated that associated with maintaining endothelial fun