3.刘伟 氧化应激抑制IGF-1神经保护作用的机制及对策的研究.ppt

氧化应激抑制IGF-1神经保护作用的机制及对策的研究 同 济 医 院: 刘 伟 导 师: 常立文 教授 李维华 教授 华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科 American Heart Association资助项目 Indiana Spinal Cord and Brain Injury Research Fund资助项目 背 景 大脑的缺氧缺血仍然是造成严重脑损伤的主要原因之一 20%死亡，高达40%幸存者遗留严重的神经系统后遗症 迄今仍无十分有效的临床手段能减轻脑损伤和改善预后 由于新生脑组织不成熟，使其对缺氧缺血反应更为敏感 背 景 IGF-1可促进神经细胞生存、分化、增殖、突触外伸已经髓鞘形成 ◆ 然而若干瓶颈阻碍了IGF-1进一步试用于临床 在新生大鼠模型，即使在缺氧缺血发生后立即心腔内注射大剂量IGF-1，脑损伤仅能减少40%左右 ◆ 缺氧缺血后延迟（6h以后）给予IGF-1治疗效果不清楚 ◆ IGF-1对脑和行为学发展的远期效果不明了 背 景 我们前期研究发现缺氧缺血后24和48h皮下注射IGF-1可显著减轻缺氧缺血诱导的不成熟鼠脑损伤，并在2个月后明显改善它们的记忆和认知行为发展（Zhong,J.Neurological Research,2009） 那么，这些新的发现提出一个问题：？为什么在缺氧缺血后立即投与IGF-1疗效不如延迟治疗明显 由于缺氧缺血后大量ROS的立即产生，我们猜想，正是这种氧化应激状态诱导了神经细胞对IGF-1的抵抗 背 景 我们进一步考虑是否能够在加入IGF-1之前加入一种抗氧化剂，以恢复神经细胞对IGF-1的敏感性 我室前期的研究证实，在缺氧缺血发生后，体外培养的神经细胞会立即产生大量的ROS（J.Zhong, W-H.Lee. Neurochemistry International.2007(51):398-404） 背 景 那么，这种抗氧化剂最好能满足以下条件： 本身没有毒副作用，不会对细胞造成新的损伤 能够很容易的进入细胞内，在胞内胞外均能发挥作用 具有良好的抗氧化功能，能够清除ROS，消除缺氧缺血 发生后的氧化应激状态 与IGF-1有协同作用，能够恢复细胞对IGF-1的反应性， 增强IGF-1对缺氧缺血后细胞的保护作用 目 的 通过建立新生大鼠神经元细胞氧化应激的模型 阐明氧化应激诱导神经细胞产生IGF-1抵抗的机制 找到一种理想的抗氧化剂，联合应用能够在氧化应激状态下增 强IGF-1对神经细胞的保护作用 ◆ ◆ 第 一 部 分 氧化应激对IGF-1诱导不成熟大脑皮层神经细胞生存信号的影响 实验分组 24h内的新生SD大鼠，取大脑皮层，分别培养神经元细胞、少突胶质细胞和星形胶质细胞，并分别给予不同的处理条件 Ⅰ、不同浓度的H2O2处理组 Ⅱ、不同浓度的IGF-1处理组 Ⅲ、不同浓度的H2O2+IGF-1处理组 和处理时间：45min、2hour和4hour 材 料 和 方 法 材 料 和 方 法 LDH法检测细胞的死亡 MTT法检测细胞的存活 Western blot检测各种蛋白的表达 数据统计 采用SPSS11.0软件进行方差分析、ｔ检验  图1-1,1-2 H2O2对神经元细胞、少突胶质细胞和 星形胶质细胞LDH和MTT的影响 与少突胶质细胞和星形胶质细胞比较，★P0.01，n=8，结果重复3次 结 果 一、大脑皮层神经元细胞对氧化应激损伤异常 敏感 图2-1,2-2 不同浓度H2O2对皮层神经元细胞LDH和MTT 的影响 n=4，结果重复3次 图2-3 不同浓度H2O2对皮层神经元细胞Caspase-3表达的 影响 Caspase-3 Cleaved Caspase-3 H2O2(uM) 0 10 20