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超临界CO2提取五味子木脂素工艺研究 　　摘要：目的研究超临界CO2流体提取(SFE-CO2)北、南五味子木脂素的工艺。方法以五味子总木脂素提取率为考察指标，以提取压力、提取温度、CO2流量等3项因素设计3个水平进行正交试验设计，确定晟佳工艺。用薄层扫描色谱法测定提取物中4种主要木脂素(五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲和五味子醇甲)的含量，并与传统的乙醇提取法比较。结果超临界C02流体提取五味子木脂素的优选工艺为：提取压力25 MPa，提取温度35℃，C02流量2 L／min。北、南五味子总木脂素的平均提取率分别为93.2％、95.5％，提取物纯度分别为13.0％、9.2％，北五味子提取物中五味予乙素含量2.89％。结论SFE-CO2法提取效率高、选择性好、操作简便，明显优于传统的乙醇提取法，可用于提取五味子木脂素。 　　关键词：北五味子：南五味子；超临界C02提取；正交试验；木脂素：五味子乙素 　　中图分类号：R284.2；R283.6 　　文献标识码：A 　　文章编号：1672-979X(2010)09.0312.04 　　五味子为木兰科植物五味子[Schisandra chinensis(Turcz.) Baill.，俗称北五味子或华中五味子；s.sphenanthera Rehd.et Wils.，俗称南五味子1的干燥成熟果实，主要活性成分为木脂素。近年发现木脂素除具有保肝降酶作用外，还具有抗癌、抗艾滋病毒HIV、拮抗血小板活化因子PAF和抑制醛糖还原酶等多种活性。由于木脂素脂溶性较强，用传统工艺(一般以乙醇为溶剂)提取强脂溶性五味子木脂素(如五味子乙素)会不完全，制剂质量也难以保证。超临界C02流体提取技术(SFE―CO2)则具有选择性好，提取效率高，操作简便等优点，尤其适用于脂溶性成分的提取，可弥补传统工艺的不足。本文研究了SFE-CO2提取五味子木脂素的工艺，并对提取物中4种主要木脂素(五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲和五味子醇甲)的含量进行了测定。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料与试剂 　　北五味子(安徽毫州医药市场)、南五味子(镇江江扬国药公司)，经镇江市药品检验所陈黎主任药师鉴定为Schisandra chinensis和sphenanthera成熟干燥果实，40℃烘干，粉碎后过40目筛，备用。 　　五昧子甲素、五味子乙素、五味子酯甲和五味子醇甲对照品(中国药品生物制品检定所，批号11 0764-200 1 07、1 1 0765.200205、111 529―200302、110857-200405)；C02气体(镇江六普液碳公司，纯度大于99％)；其他试剂均为分析纯。 　　 　　1.2仪器 　　UV-2102PCS型紫外可见分光光度计(尤尼柯上海分析仪器公司)；瑞士CAMAG TLCS Canner-3薄-层扫描仪；瑞AsCAMAG Linomat 5半自动点样仪；Metter AE240分析天平；自动薄层涂布器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)；R-200型旋转蒸发仪(瑞士BUchi公司)。 　　 　　1.3方法 　　1.3.1正交试验设计在预试验的基础上，以五味子总木脂素提取率为考察指标，选取提取压力、提取温度和C02流量3项因素，设计3个水平进行正交试验。因素及水平见表1。 　　1.3.2 SFE-C02提取五味子药材粉末20 g，置入提取器中，静态浸泡5 h后在一定的提取条件下超临界C02提取3 h，得五味子超临界提取物。 　　1.3.3乙醇提取五味子药材粉末20 g，加入80％乙醇溶液160 mL，回流提取2次，每次2 h，提取液经减压浓缩得五味子醇提物浸膏。 　　1.3.4木脂素含量的测定 　　1.3.4.1总木脂素含量绘制标准曲线：精密称取7.5 mg五味子酯甲对照品，氯仿溶解，定容于50 mL容量瓶中，摇匀，得浓度0.15 mg／mL的对照品溶液。精密量取对照品溶液0，0.2，0.6，1.0，1.4，I.8 mL于具塞试管中，水浴加热挥干溶剂，依次加入10％变色酸溶液0.5 mL，浓硫酸3 mL，水1.5 mL，摇匀，密塞，沸水浴30 Ynln，取出，迅速冷却至室温，加水定容至10 mL，摇匀。以0号试管为空白，于570 am处测定吸光度，以浓度c为横坐标、吸光度A为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程A=38.019c+0.036 7，r=0.999 9，五味子酯甲在0.001 5-0.021 0 mg／mL浓度范围内有良好的线性关系。 　　药材中总木脂素含量的测定：精密称取北、南五味子药材粉末适量，加甲醇30 mL，回流提取50min，过滤，残渣用甲醇30 mL清洗3次，合并甲醇溶液，水浴蒸干，残渣用氯仿溶解，定量过滤至50 mL