乙酰化蛋白的判定研究.pdfVIP

摘要 乙酰化是一种可逆且高度调控的蛋白质翻译后修饰，主要发生于蛋白质赖氨酸 残基的￡小m2位，它调控细胞凋亡、亚细胞的定位、DNA和蛋白质相互作用、 DNA复制和修复、DNA转录的活性及蛋白质的稳定性等蛋白质相关过程。赖氨 酸的乙酰化修饰和调控其发生的酶与生命的老化过程及一些重大的疾病如癌症， 心血管疾病存在着密切的联系，由此蛋白质乙酰化翻译后修饰的鉴定具有重要的 生物学意义。传统乙酰化蛋白鉴定的方法有放射性检测和免疫亲和检测，但是这 些方法都仅能检测到乙酰化蛋白的存在，不能得到具体的乙酰化修饰位点信息。 软电离生物质谱技术ESI．MS和MALDI．MS能很好地应用于翻译后修饰的鉴定 研究，不仅能检测到翻译后修饰蛋白，且能得到具体的修饰位点信息。 本论文的研究工作旨在考察两类生物质谱技术ESI．MS和MALDI．MS在乙酰 化蛋白质翻译后修饰鉴定中的应用及其应用于小鼠肝乙酰化修饰谱的鉴定研究。 本论文的第一章主要对蛋白质组学中翻译后修饰的研究发展，各种翻译后修饰的 鉴定研究策略，乙酰化翻译后修饰研究进展进行了概述。本文的研究工作主要分 为两个部分，分别在第二章和第三章中作了详细介绍。第二章的研究中，利用两 MALDI．MS(4700Proteomics Analyzer质谱仪，QIT质谱仪)，对乙酰化标准 蛋白乙酰化BSA进行质谱鉴定研究，为小鼠肝乙酰化蛋白质修饰谱的鉴定研究提 (4700 proteomicanalyzer)两种方法鉴定乙酰化蛋白较另外两种质谱方法优越， 且这两种方法在乙酰化后修饰鉴定上具有互补的特性。在第三章的研究中，我们 根据第二章的研究设计了两条小鼠肝乙酰化蛋白的鉴定研究路线，其一为利用成 熟的蛋白质分离技术二维凝胶电泳(2DE)分离鼠肝全蛋白，采用生物医学研究 院赵世明老师提供的赖氨酸乙酰化抗体进行2D Western．Blotting验证，将 Proteomics 蛋白点切胶酶解，用4700 Analyzer质谱仪鉴定分析，鉴定到6个赖氨 酸乙酰化蛋白，8个赖氨酸乙酰化修饰位点。其二为利用免疫沉淀技术富集小鼠 肝全蛋白中的乙酰化蛋白，用LTQ．Orbitrap质谱仪分析鉴定，鉴定到91个赖氨 酸乙酰化蛋白，216个赖氨酸乙酰化修饰位点。在鉴定到的97个乙酰化蛋白中， 大部分未有被文献报道过。我们对鉴定到的蛋白进行了生物功能、生理过程、亚 细胞定位的分类。此外，我们用Q．Star飞行时间质谱仪(ESI源)进行了小鼠肝 中苏氨酸和丝氨酸上的乙酰化蛋白翻译后修饰鉴定，鉴定了18个苏氨酸乙酰化翻 译后修饰蛋白，21个苏氨酸乙酰化修饰位点，25个丝氨酸乙酰化修饰蛋白，30 个丝氨酸乙酰化修饰位点，极大地补充了数据。本论文的第四章对乙酰化翻译后 修饰的发展做了总结，对本论文的研究工作进行了展望。 本研究为首次结合两类生物质谱技术对小鼠鼠肝样品进行大规模的乙酰化蛋 白修饰谱鉴定分析，为后续的乙酰化蛋白功能分析及其与重大疾病和癌症的相关 性研究提供了很好的数据库参考。 关键词翻译后修饰乙酰化蛋白质谱免疫沉淀 中图分类号0657．63 2 AbStract and isareversible Lysineacctylation higmyregulatedposttranslational atthesiteof of inthe modification．ItOObUrs g-NH2lysine protein．The mainly modificationdiverse interactions， regulatesproteinproperties