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微生物实验?报告 酵母菌的培?养及观察实?验刘欣怡20?11001?40057? 生物科学基?地班 组别：周一下午三?组 同组者：曹平平，周楠，刘艺，刘希伟 实验完成时?间：2012年?11月19?号一、实验目的1、了解酵母菌?的形态及出?芽方式2、学习区分酵?母菌的死细?胞和活细胞?3、掌握酵母菌?子囊孢子的?观察方法4、巩固显微镜?操作技术和?无菌操作技?术二、实验器材1．菌种 ： 酿酒酵母7?d麦氏培琼?脂（产孢培养基?）斜面培养物?，酿酒酵母2?d YPD（酵母合成培?养基）液体培养物?。2. 培养基 ：酵母合成培?养基，麦氏琼脂斜?面3、试剂：0.01%美蓝水溶液?，5%孔雀绿水溶?液，0.5%番红水溶液?，95%乙醇，蒸馏水、香柏油、去离子水等?。4. 仪器试管，锥形瓶，酒精灯，显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，盖玻片，双层瓶，接种环，滴管，滤纸，镊子、培养皿等。三、实验原理1、培养基：酵母菌的能?源主要是糖?，一般用麦芽?汁琼脂培养?基培养。但实验要求?不是很严格?时，可以用由酵?母膏、蛋白胨、葡萄糖配置?的培养基来?培养；但酵母菌子?囊孢子的观?察要用麦氏?培养基，其有利于子?囊孢子的形?成。2、酵母菌：酵母菌是多?形的、不运动的单?细胞真核微?生物，细胞核与细?胞质已有明?显的分化，菌体比细菌?大。繁殖方式也?较复杂，无性繁殖主?要是出芽生?殖，仅裂殖酵母?属是以分裂?方式繁殖；有性繁殖是?通过接合产?生子囊孢子?。本实验通过?用美蓝染色?浸片来观察?生活的酵母?形态和出芽?生殖方式。3、酵母菌的形?态、大小、结构：酵母菌是单?细胞真菌，并非系统演?化分类的单?元；酵母菌细胞?的形态通常?为圆形、卵圆形或椭?圆形。也有特殊形?态，如柠檬形、三角形、藕节状、腊肠形，假菌丝等 ；比细菌的单?细胞个体要?大得多，一般为1-5微米×5-20微米；酵母菌无鞭?毛，不能游动；酵母菌具有?典型的真核?细胞结构，有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有?微体。 4、美蓝染色液?：美蓝为无毒?性染料，其氧化型为?蓝色，而还原型为?无色。用它对酵母?菌染色时，由于活细胞?的新陈代谢?作用，使细胞内具?有较强的还?原能力，能使美蓝从?蓝色的氧化?型变为无色?的还原型，所以酵母的?活细胞无色?；对于死细胞?或代谢缓慢?的老细胞，则因它们无?此还原能力?或还原能力?极弱，而被美蓝染?成蓝色或淡?蓝色。因此，用美蓝水浸?片不仅可观?察酵母的形?态，还可以区分?死、活细胞。 还原剂（活细胞的新?陈代谢）美蓝（氧化型） 美蓝（还原型）氧化剂（死细胞无还?原能力） 蓝色 无色5、水-碘液染色液?：该染液将革?兰氏染液用?碘液用水稀?释4倍后得?到的，亦可用于酵?母形态和出?芽生殖的观?察。6、子囊孢子的?观察：酵母菌形成?子囊孢子需?要一定的条?件。麦氏培养基? 有利于酿酒?酵母子囊孢?子的形成，能否形成子?囊孢子及其?形态是酵母?菌分类鉴定?的重要依据?之一。孢子染色原?理：孢子壁厚不?易着色，但是一旦着?色就很难被?脱色。因此先用强?染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入?菌体和孢子?，水洗时菌体?中染色被洗?脱而孢子中?染料保留。在用对比度?大的复染色?剂染色后，菌体染上复?染色剂的颜?色而孢子保?留原来颜色?，这样可将两?者区别开来?。酵母菌子囊?孢子的形成?过程为：两营养细胞?各伸出一个?小突起而相?接触，使两个细胞?结合起来，而后接触处?的细胞溶解?，经质配和核?配后，形成双倍体?核，原来的细胞?形成合子。此双倍体细?胞可以进行?芽殖。在适宜条件?下，合子减数分?裂，双倍体核分?裂成4-8个单倍体?核，核外再围以?原生质逐渐?形成子囊孢?子，子囊孢子包?含在由母细?胞壁演变而?来的子囊(即原来的二?倍体细胞)中。子囊孢子的?形成与否及?其数量和形?状，是鉴定酵母?菌的依据之?一。 将酿酒酵母?从营养丰富?的培养基上?移植到含有?醋酸钠和葡?萄糖(或棉籽糖)的产孢培养?基上，于适温下培?养，即可诱导其?子囊孢子的?形成。本实验即以?酿酒酵母为?材料观察酵?母菌的子囊?孢子。 7、 酵母菌是少?数能在缺氧?环境里生存?较长时间的?一种微生物?，它属于兼性?菌类。在一般情况?下进行有氧?呼吸。如环境中有?丰富的糖类?，它进行缺氧?呼吸。其过程如下?：（1）C6H12?O6+6O2→6CO2+6H2O+2.87×103兆焦?（有氧呼吸） （ 2 ）.C6H12?O6→2CO2+2C2H5?OH+109×103 兆 焦 （ 缺 氧 呼 吸 ）四、实验内容 用酵母合成?培养基（液体状）培养酵母菌?后，进行制片并?用美兰染色?，进行酵母菌?出芽及细胞?死活的观察?；用麦氏培养?基（固体斜面）培养酵母菌?一周后，涂片制片，