实验一 细菌形态观察和染色实验PPT.pptVIP

实验一 细菌形态观察和染色实验 一、目的要求 学习微生物涂片、染色基本技术和无菌操作技术; 初步掌握革兰氏染色法; 巩固显微镜（油镜）的使用方法; 初步认识细菌的形态特征。 二、基本原理 革兰氏染色程序 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 番红复染 最终结果 原理 革兰氏阳性菌(G+) 蓝紫色 蓝紫色 蓝紫色 蓝紫色 蓝紫色 细胞壁肽聚糖层呈网状，壁厚、类脂含量低，乙醇脱色时细胞壁脱水、网状结构孔径缩小，透性降低，结晶紫—碘的复合物仍保留在细胞内 革兰氏阴性菌(G-) 蓝紫色 蓝紫色 无色 红色 红色 细胞壁肽聚糖层薄、类脂含量高，乙醇脱色时类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，结晶紫—碘的复合物较易洗脱出来 三、器材 菌种 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物，枯草芽孢杆菌12～24h营养琼脂斜面培养物。 染色剂 革兰氏染色液。 仪器或者其他用具 显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，生理盐水等 涂片 涂成薄膜 干燥 自然干燥 固定 通过火焰2～3次 结晶紫初染 1-2min 碘液媒染 1min 乙醇脱色 至流出的乙醇无紫色 番红复染 2min 油镜镜检观察。 四、操作步骤 混合涂片涂色 按上述方法，在同一载玻片上，以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌或大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作混合涂片、染色、镜检进行比较。 现场演示 1 载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚； 2 热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态； 3 染色时，每一步骤后都要立即水洗； 4 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌，脱色时间一般20～30S。 注意：