微生物学实验—张小葵、赵丽华PPT.ppt

实验一 、培养基的制备;实验步骤 配培养基（250ml/组） 牛肉膏蛋白胨培养基（P50、 P214 ） 高氏Ⅰ号培养基（P54、 P214 ） 查氏培养基（ P214 ） 包扎移液管（1支/人）、培养皿（4皿/人），做棉花塞。 分装入试管（ 2个/人）和500ml三角烧瓶内（1个/组），注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。固体分装的装量不超过管高的1/5，灭菌后取出斜躺凝固成斜面。 在试管（捆扎好）、三角烧瓶的棉塞外包两层报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞。注明培养基名称、组别、日期等。 ;实验二、消毒(disinfection)与灭菌(sterilization);实验三、普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色;实验三、普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色;实验步骤 涂片→干燥→固定(在微火上通过3—4次)→染色（染色1min）→冲洗→吸干→镜检 实验结果讨论 思考题;实验四、环境中微生物的分离与纯化;实验步骤 采土样：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~25cm深度的土壤数10g,装入已灭菌的牛皮纸袋,封好袋口,带回实验室。 倒平板（8个/组） 制备土壤稀释液：称取土样10g， 放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，摇30min。 取样：用无菌棉签沾取菌悬液，涂布于培养皿中某一处。（4个/皿） 用接种环从接种处划线分离。 贴标签，37℃倒置培养，24h。 实验结果与讨论 思考题;实验五、细菌的革兰氏染色;实验材料 1．菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌斜面（37℃下培养10小时左右） 2．染液：结晶紫染液、95%乙醇、碘液、番红染液、蒸馏水。 3．用具：载玻片、接种环、酒精灯、火柴、香柏油、乙醇乙醚混合液、擦镜纸、显微镜等。 实验步骤 涂片：将大肠杆菌（Escherichia.coli）、 枯草芽孢杆菌（Bacillus.sub）斜面分别涂片、干燥、固定。 初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗 媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗 脱色：将水甩净，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，约20—30秒，立即用水冲净乙醇 复染：用番红液染1--2分钟，水洗 镜检 结果与讨论 思考题;实验六、细菌的芽孢染色;实验器材 菌：枯草杆菌（Bacillus subtilis）、巨大芽包杆菌 染色液和试剂：5%??雀绿水溶液、0.5%蕃红水溶液 器材：小试管（75mm×10mm）、烧杯（300mL）、滴管、木夹、接种环、擦镜纸、镊子、显微镜等。 实验步骤 孔雀绿染色法 制片：涂片、干燥、固定 滴孔雀绿染液于涂片中，加热至产生蒸汽达3~5min（加热时用木夹夹着载玻片，在火焰上方2~3cm处，或火焰附近，添加染液勿使图片干燥）;水洗：待玻片冷却后 ，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。 复染：用蕃红液染色1~2min。 水洗、晾干或吸干。 镜检：先低倍，再高倍，最后在油镜下观察芽胞和菌体的形态。 石炭酸复红染色法 试管一支，加蒸馏水3~4滴，取1-2环芽孢杆菌于水中，并充分摇荡制成菌悬液。 滴加等量3~4滴石炭酸复红溶液摇匀，水浴煮沸10min以上。 取上述加热后的染色菌悬液2~3环于载玻片上制成涂片，然后经过干燥，火焰固定，水洗。;美兰复染1~2min，经水洗，干燥后，镜检，绘图。 实验结果及讨论 绘出所用材料菌体的形态和芽胞的着生位置图。 思考题;目的要求 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 基本原理 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。 器材 菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）培养约2d的马铃薯斜面培养物。 染色剂：0.05％和0.1％吕式碱性美蓝染色液，革兰氏染色用碘液。 仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片等。;;操作步骤 美蓝浸片的观察 按无菌操作取少量酵母菌与0.1％吕式碱性美蓝染色液混合均匀，放置约3min后，先用低倍镜后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并用颜色区别死活细胞。 染色0.5h后再次观察，注意死细胞是否增加。 用0.05％美兰染液重复上述操作 观察酵母形态及出芽方式 实验结果及讨论 记录美兰浸片的观察结果；酵母形态及出芽方式； 思考题;实验八、微生物细胞大小的测定;n1;实验器材 活材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)斜面菌种、枯草杆菌(Baccillus subtilis)染