提高常规切片质量的几个关键问题PPT.ppt

提高常规切片质量的几个 关键 华中科技大学同济医学院病理系 郝 春 荣; 常规切片技术在病理技术中是一项既普通又非常重要的技术，制片质量的好坏，直接关系到临床病理的正确诊断，高质量的切片可以给病理诊断带来极大的方便，否则，病理诊断困难，甚至给病人造成极大的痛苦，因此，常规制片的质量在病理诊断中显得尤为重要。 高质量的制片技术关键在于组织的固定、脱水、浸蜡与包埋等步骤，但是对于切片刀的研磨也不能忽视。 ;一、 组织固定： 组织固定是常规制片致关重要的一环，作好组织固定将是高质量切片的开端，往往由于组织固定不当，而影响制片的整个过程。首先，我们必须了解固定的目的、固定剂的种类及其性质、优缺点。; 1. 固定的目的：（1） 防止组织溶解及腐败。（2）?使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各 种成分沉淀下来，保持原有的组织结构 与生活时相仿。（3）? 沉淀及凝固使细胞内成份产生不同的折 射率，造成光学上差异，使得在生活情 况下原来看不清楚的结构变得清晰起来， 并使得细胞各部分容易染色。（4）?固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增 加组织硬度使组织不易变形，有利于固 定以后的处理。 因此固定是制片过程中 重要一环节，也是高质量切片的基础。; 2. 固定剂具备的性质：（1）? 迅速渗入组织杀死原生质，在杀死的短期内， 细胞形态不至所变化，使组织可以久存。（2）? 必须具有相当的渗透力，对组织各部分的渗  透力相等，可使组织内外完全固定，使细胞  不至于因固定引起人为的改变。（3）?固定后增加细胞对各种穿透力的抵抗力，不  至于因以后的处理使固定的组织变形。（4）??尽可能避免组织膨胀或收缩。（5）??使组织内的成份（蛋白质）凝固或沉淀，组  织变硬适于切片。（6）??增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，增  加媒染作用和染色能力; 乙醇： （1） 可沉淀白蛋白、核蛋白、球蛋白、肝糖。 （2） 穿透组织速度很好，使组织硬化显著， 在高浓度酒精中留置过久，组织发脆， 组织收缩厉害，约可缩小20%体积，仅 可在70%酒精内久存。50%以上浓度可 溶解脂肪及类脂体，能溶解血色素及损 害多数其它色素。 ; 醋酸：（1）穿透组织速度很快，不能沉淀细胞质 的蛋白质，所以组织不会硬化。（2）对染色体的保存非常好。（3）醋酸能使组织膨胀，特别对于胶原纤维 及原浆中的纤维蛋白，故单独使用只能 短时固定，一般与其它固定剂混合使用。 Zenker、Bouin、Carnoy等混合  固定液中均含冰醋酸，Carnoy可达  10%。;4、 固定液的用量及固定时间： 固定液的用量 固定剂的量要充足，至少为组织体积 的4倍以上，一般为10-15倍。容器勿 过小，避免组织内水分在固定时渗出， 影响固定剂的浓度，勿使组织贴于瓶 底或瓶壁，以免影响固定剂的渗入。 ; 固定时间 视标本的种类、性质、大小、固定剂 的种类、性质、渗透力的强弱而定， 可以1-2小时至十几小时或更长，一  些小组织仅须几十分钟。如Carnoy 对组织硬化作用较强，不宜时间过长， 而Bouin固定时间可较长，一般为24 小时左右。;二、?组织脱水： 水在组织内能使组织分解，水份与石蜡等包埋剂不能相溶，因此，在制片过程中，脱水是否彻底直接影响着组织的透明与浸蜡。组织内的水份必须通过脱水剂将其完全脱出，才有利于组织的透明与浸蜡，也有利于组织的永久保存。否则，即便是延长透明与浸蜡时间，包埋后也难以切出高质量的切片。 ; 1、 常用脱水剂及