胃肠肿瘤基因检测PPT.pptVIP

中山大学附属第一医院病理科 肖萍; 胃癌与HER2检测 结直肠癌与EGFR、KRAS检测 胃肠间质瘤与C-KIT检测 ;胃癌与HER2检测;胃癌概述;胃癌病理表现;HER：human epidermal growth factor receptor，人类表皮生长因子受体 HER2，又名c-erbB-2；原癌基因，位于17q21，编码跨膜糖蛋白，具有跨膜酪氨酸激酶活性； 通过参与信号传道通路的一系列活动影响细胞的增殖与分化。 ;信号传导 至细胞核;1 = - 基因拷贝数 2 = - mRNA 转录 3 = - 细胞表面受体蛋白表达 4 = - 细胞外受体功能域释放; HER2基因的致瘤机制： 抑制凋亡，促进增殖； 增加肿瘤细胞的侵袭力； 促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。 研究表明： 30％以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/ 过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜 癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等 ;HER2在胃癌中表现;关键步骤包括;0;标本收集;标本固定;石蜡包埋;切片和脱蜡;概念：用标记的特异性抗体对组织切片标本中某种化学成分的分布和含量进行组织原位定性、定位或定量研究。 基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织内抗原，对其进行定位、定性及定量的检测 ;免疫组化步骤;胃腺癌HER2检测可见不完全细胞膜染色;IHC 阴性 (0) 不染色或 10% 的细胞膜染色;FISH技术介绍;样本预处理 探针、样本变性 探针＋样本杂交 杂交后洗涤 结果观察;肠型; FISH技术的特点;结直肠癌与EGFR 、KRAS检测;定义：发生于结直肠粘膜上皮的恶性肿瘤 流行病学： 地域性：不同地区发病率有明显区别 高发：北美、西欧、澳洲等；低发：日本、南美、非洲等 年龄：国内以40~50岁为多，中位数为45左右，40岁以下者全部病例的1/3左右；高发国家大肠癌高发年龄为60~70岁 好发部位：直肠、乙状结肠 病理分型：同胃癌;EGFR与KRAS;Schubbert S et al., Nat Rev Cancer 2007; 295-308;Schubbert S et al., Nat Rev Cancer 2007; 295-308;;在结直肠癌中，K-ras基因突变率为35%-45%，已成为EGFR单克隆抗体治疗结直肠癌的主要疗效预测标志物。 NCCN指南明确指出所有转移性结直肠癌患者都应检测K-ras基因状态。提高肿瘤???床治疗的针对性，降低治疗费用，节省宝贵的治疗时间。 美国ASCO 推荐把K-ras 12、13号密码子突变检测作为结直肠癌患者接受EGFR单抗治疗的预测指标。 ;K-RAS突变检测;检测方法：PCR 基本原理： 利用PCR法扩增目的基因片段进行测序 检测样本： 肿瘤组织或其石蜡病理切片提取的DNA;;K-RAS突变检测;;胃肠间质瘤（Gastrointestinal Stromal Tumor，GIST）;GIST：发病机制;GIST发病过程;临床表现;梭形细胞型;病理学表现－免疫组化; CD117;GIST的病理诊断依据;组织学表现符合典型GIST,CD117、 DOG-1阴性病例;检测基因突变的位点：6个 C-kit基因第9、11、13和17号外显子 PDGFRA基因第12和18号外显子 由于大多数GIST（70%-85%）的基因突变发生在C-kit基因第11号外显子或第9号外显子，因此可优先检测这两个外显子。;;组织学表现符合典型GIST，CD117、DOG-1阴性，且无基因突变的病例的处理;标本处理 手术后标本的固定: 所有的标本应该在离体后尽快的进行相应的保存和固定 固定的意义： 使蛋白质、核酸等大分子在原位凝固沉淀 使细胞内各种酶灭活，防止细胞自溶 保证免疫组织化学及分子学检测的可靠性和准确性 所有的组织学标本建议用10%的中性福尔马林固定，应该避免使用酸性的福尔马林或是Bouin液固定;免疫组化推荐Envision两步法： 抗体CD117、DOG1：Dako 抗原修复：1：400 柠檬酸缓冲液（pH6.0）热修复 ;对象 对诊断疑难病例（组织学符合GIST，但CD117、DOG1 阴性） 推荐对所有高危性、转移复发性GISTs进行突变分析 家族性GIST，儿童GIST， NF1（1型神经纤维瘤病） 意义 明确诊断 指导治疗 ;方法 PCR扩增-直接测序 基因检测应该在有资质的实验室进行 应优先检测最常见的突变位点 C-kit 11、9、13、17；PDGFRA 12、18 ;C-kit基因突变： c-kit 基因的靶向药物---伊马替