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第五章 第四节 毛细管电泳 一、CE六种分离模式1. 毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis， CZE)，又称毛细管自由电泳，是CE中最基本、应用最普遍的一种模式。 2. 胶束电动毛细管色谱 (micellar electrokinetic capillary chromatography， MECC)，是把一些离子型表面活性剂 (如十二烷基硫酸钠， SDS) 加到缓冲液中， 当其浓度超过临界浓度后就形成有一疏水内核、外部带负电的胶束。 3. 毛细管凝胶电泳 (capillary gel electrophoresis， CGE) 是将板上的凝胶移到毛细管中作支持物进行的电泳。凝胶具有多孔性，起类似分子筛的作用，溶质按分子大小逐一分离。凝胶粘度大，能减少溶质的扩散，所得峰形尖锐，能达到CE中最高的柱效。 4. 毛细管等电聚焦 (capillary isoelectric focusing， CIEF) 将普通等电聚焦电泳转移到毛细管内进行。通过管壁涂层使电渗流减到最小，以防蛋白质吸附及破坏稳定的聚焦区带，再将样品与两性电解质混合进样，两端贮瓶分别为酸和碱。加高压(6～8kV)3～5min后，毛细管内部建立pH梯度，蛋白质在毛细管中向各自等电点聚焦，形成明显的区带。最后改变检测器末端贮瓶内的pH值，使聚焦的蛋白质依次通过检测器而得以确认。 　　5. 毛细管等速电泳 (capillary isotachor-phoresis，CITP) 是一种较早的模式， 采用先导电解质和后继电解质，使溶质按其电泳淌度不同得以分离，常用于分离离子型物质，目前应用不多。 6. 毛细管电色谱 (capillary electrochromatography， CEC) 是将HPLC中众多的固定相微粒填充到毛细管中，以样品与固定相之间的相互作用为分离机制，以电渗流为流动相驱动力的色谱过程，虽柱效有所下降，但增加了选择性。此法有发展前景。 二、对仪器的一般要求 　　毛细管电泳仪的主要部件和其性能要求如下。 毛细管用弹性石英毛细管，内径50μm和75μm两种使用较多（毛细管电色谱有时用内径再大些的毛细管）。细内径分离效果好，且焦耳热小，允许施加较高电压，但若采用柱上检测因光程较短检测限比较粗内径管要差。毛细管长度称为总长度，根据分离度的要求，可选用20～100cm长度，进样端至检测器间的长度称为有效长度。毛细管常盘放在管架上控制在一定温度下操作，以控制焦耳热，操作缓冲液的黏度和电导度，对测定的重复性很重要。直流高压电源采用0～30kV（或相近）可调节直流电源，可供应约300μA电流，具有稳压和稳流两种方式可供选择。电极和电极槽两个电极槽里放入操作缓冲液，分别插入毛细管的进口端与出口端以及铂电极，铂电极接至直流高压电源，正负极可切换。多种型号的仪器将样品瓶同时用做电极槽。冲洗进样系统每次进样之前毛细管要用不同溶液冲洗，选用自动冲洗进样仪器较为方便。进样方法有压力（加压）进样、负压（减压）进样、虹吸进样和电动（电迁移）进样等。进样时通过控制压力或电压及时间来控制进样量。检测系统紫外-可见光分光检测、激光诱导荧光检测、电化学检测和质谱检测均可用作毛细管电泳的检测器。其中以紫外-可见光分光光度检测器应用最广，包括单波长、程序波长和二极管阵列检测器。将毛细管接近出口端的外层聚合物剥去约2mm一段，使石英管壁裸露，毛细管两侧各放置一个石英聚光球，使光源聚焦在毛细管上，透过毛细管到达光电池。对无光吸收（或荧光）的溶质的检测，还可采用间接测定法，即在操作缓冲液中加入对光有吸收（或荧光）的添加剂，在溶质到达检测窗口时出现反方向的峰。数据处理系统与一般色谱数据处理系统基本相同 三基本操作 按照仪器操作手册开机，预热，输入各项参数，如毛细管温度、操作电压、检测波长和冲洗程序等。操作缓冲液须过滤和脱气。冲洗液、缓冲液等放置于样品瓶中，依次放入进样器。毛细管处理好坏对测定结果影响很大。未涂层新毛细管要用较浓碱液在较高温度（例如1mol/L氢氧化钠液在60）冲洗，使毛细管内壁生成硅羟基，再依次用0.1mol/L氢氧化钠，水，操作缓冲液冲洗各数分钟。两次进样中间可仅用缓冲液冲洗，但若发现分离性能改变，则开始须用0.1mol/L氢氧化钠冲洗，甚至要用浓氢氧化钠液升温冲洗。凝胶毛细管，涂层毛细管，填充毛细管的冲洗则应按照所附说明书操作。冲洗时将盛溶液样品瓶依次置于进样器，设定顺序和时间进行。操作缓冲液的种类、pH值和浓度，以及添加剂（用以增加溶质的溶解度和/或控制溶质的解离度，手性拆分等）的选定对测定结果的影响也很大，应照各品种项下的规定配制，根据初试的结果调整、优化。将待测样品溶液瓶置于进样器中，设定操作参数，如进样压力（电动进样电压）、进