02药敏试验PPT.pptVIP

2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。 3.置于无菌生理盐水中，校正其浊度于McFarland No 0.5管。 4.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向均匀抹琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。 5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置3~10分钟 后贴上标准抗生素纸片。 6.根据选择的菌株挑选相应的抗菌纸片。 肠杆菌科：氨苄西林、阿米卡星、哌拉西林/ 他唑巴坦、头孢噻肟、环丙沙星、亚胺培 南、氨曲南、庆大霉素； 铜绿假单胞菌：头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林、 阿米卡星、环丙沙星、头孢吡肟、亚胺培南； 葡萄球菌属：头孢西丁、青霉素、红霉素、万古霉 素、环丙沙星、庆大霉素、利福平 ； 肠球菌属：青霉素 、万古霉素 、甲氧苄啶/磺胺异 噁唑 、庆大霉素、环丙沙星、红霉素、氨苄西林 不动杆菌属：头孢他啶 、亚胺培南、阿米卡星、哌拉 西林/他唑巴坦、头孢吡肟 、头孢曲松 、环丙沙 星、米诺环素； 洋葱伯克霍德菌：头孢他啶 、米诺环素、甲氧苄啶/磺 胺异噁唑 、美罗培南 ； 嗜麦芽窄食单胞菌：甲氧苄啶/磺胺异噁唑、左氧氟沙 星、米诺环素 ； 嗜血杆菌属：氨苄西林、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、头孢 他啶、美罗培南、阿奇霉素、环丙沙星、头孢克洛； 淋病奈瑟菌：头孢曲松、环丙沙星、青霉素、大观霉素、 四环素 ； 肺炎链球菌：红霉素 、苯唑西林 、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、克林霉素、左氧氟沙星、四环素、万古霉素 ； 除肺炎链球菌外的其他链球菌：红霉素、青霉素、克林霉素、万古霉素、头孢曲松、左氧氟沙星。 7.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂 的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中 心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。 8.经过35℃16～24h孵育。 9.取抑菌环直径，根据 CLSI（clinical and laboratory standards institute ）标准，报 告细菌对该抗生素 敏感(susceptible,S)、 耐药(resistant,R)、 中介(intermediate,I)。 [结果判断] 量取抑菌环大小，查表判断结果。同时应做标准菌株对照并查表。 例外： 1.磺胺和复方磺胺在抑菌圈内往往有少量细菌生长，应予以忽略； 2.某些变形杆菌在抗菌素纸片周围向抑菌圈内蔓延生长，但抑菌圈边界仍清晰可变，这种蔓延生长的稀薄层应予以忽略； 3.测定青霉素对青霉素酶的葡萄球菌作用时，产生堆起的边缘清晰、易于辩认的抑菌圈，不管抑菌圈大小如何均应报告耐药。 标准结果判读表 [影响因素] 1.培养基：MHA平板 如：厚薄（4mm，太厚，抑菌环直径↓；太薄，直径↑） PH 7.2+0.1 偏硷,氨基糖苷类药物抑菌环↑ 偏酸，四环素类药物抑菌环↑ 硬度（琼脂质量、浓度 2% ）浓度过高影响扩散，抑菌环直径↓ 浓度过低 ， 抑菌环直径↑ 拮抗物质： 如PABA，对氨基苯甲酸可使磺胺类药物敏感性↓ Ca,Mg离子，缺乏可使四环素，庆大药敏感性↑，故要使这些离子浓度在规定范围内。 另：培养基中的血液、表面湿度也有影响 对每批商品化或自配MH琼脂必须用标准质控菌株进行检测 2. 药敏纸片： 浓度、干燥、保存这三方面重要（浓度每片应一致；冷冻干燥法最好，37℃烘干可降低青霉素抗菌活性；低温干燥保存最佳，不妥则药效↓，抑菌环直径↓） 常规用量之外的药敏实验纸片最好在一20℃保存。药敏纸片应在药敏试验前从低温保存处取出纸片达到室温时再使用。 纸片保存应用过程中应注意有些药敏纸片如某些喹诺酮对光不稳定。应注意避光保存。含有β-内酰胺酶抑制剂和亚胺培南的纸片怕潮湿，应加入干燥剂保存。 对于含B．内酰胺酶抑制剂的纸片，应用产β-内酰胺酶的大肠埃希菌ATCC35218来进行检测，观察抑菌圈直径是否由于抑制剂的降解而减小。 有些纸片并不经常使用，特别是规模较小的实验室，应注意纸片的使用期限，不要使用过期的纸片。 3. 接种细菌的量、时间及温度等 菌量：大，抑菌环直径↓；小，则抑菌环直