[物理]分析仪常用光学知识.doc

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第一章 生化分析仪所用光学基础知识 一个人员,要了解掌握就容易做到融汇贯仪器分析法的研究对象是化学物质,测量的不是物质本(如对光)同它 随着电子技术,计算机技术,激光技术等新技术的发1·光学分析(建立在物质与辐射能2·电化学分析法(以电,化学的原理为),3·色谱分析法4·热分析法 光分析法中物质与辐射能关系表现的主要物理性质及测I-1。当物质与辐 1-l 被测物理性质 相应分析方法 光 谱 法 辐射的吸收 辐射的发射 辐射的散射 分光光度法(X射线、紫外、可见,红外),此色法;原子吸收法;核磁共振波谱法等 发射光谱法;火焰光度法,荧光法,放 射化学法 浊度法,散射浊度法,拉曼光谱法 非 光 谱 法 辐射的折射 辐射的衍射 辐射的旋转 折射法,干涉法 X射线衍射法,电子衍射法· 偏振法;旋光色散法等 射能作用时,物质内部产生量子化的能级跃迁(即组成物质)时,测量由此产生的发射、吸收本书内容都是由物质对辐射吸收光谱法引起的介绍与讨hγ=he/λ 式中:E为光子的能量(J:焦耳),h为普郎克常量(6.63×10-34J·s),γ为频率,λ为波长。 从能量公式可知,由于紫外波长比红外波长短,所以紫外辐射的光子比红外辐射的光子具有更高的能量。通常波长越短,能量越大,波长越长,能量越小。 电磁波谱; 就广义言,各种电磁辐射都属于光谱我们通常讲的(本书中讨论的光谱),而人类眼睛能辨认的光又仅为光波区内波长为78 0 nm范围的可(简称IE) 根据标准观察者的试验定义了此波长范围的辐射为可见光。 下图给出了按波长划分波谱区的电磁辐射图中显见400nm或大于760nm的紫外或红外光都是人们眼睛看不见的光,称为不可见光。 复习题: 1.了解光谱的大概范围。记住波长的单位换算关系。(米、分米、厘米、毫米、纳米等) 第二节 光对物质的选择吸收 一、光对物质的选择吸收 不同溶液呈现不同的颜色,这是由于物质对光选择性吸收的缘故。在光照射下,如果可见光完全被吸收,则溶液呈黑色。冬天穿黑色衣服保温也是这个道理。如对可见光波不怎么吸收,则溶液显得透明无色;对不同波长的可见光具有选择性地吸收,则溶液呈现不同的颜色。例如:当白光通过氯化钴溶液时,它选择的吸收了蓝、绿色光,而其他颜色的光很少被吸收或不被吸收而通过溶液,因而氯化钴溶液就呈现出透过光的颜色为红色。 通常用光的吸收曲线来描述溶液对各种波长光的吸收情况。使波长不同的光通过对某一固定浓度的有色溶液,然后测量溶液对不同波长的吸收程度(吸收度)。以波长为横坐标,吸光度为纵坐标,绘出的曲线叫吸收曲线。 图1.1 氯化钴溶液的吸收曲线 图1.2 互补色光示意图 从图1.1中的曲线可知在510nm处氯化钴对红光不吸收所以呈红色。 物质对光吸收最大处叫吸收峰,不同物质对光吸收的吸收峰不同。吸收曲线反映了溶液对光吸收的选择性。吸收程度随浓度增加,因此,可以选择一部分波长被吸收程度即吸光度来测定溶液的浓度。 二、 比色分析的基本理论 许多化学物质具有颜色,有些无色的化合物也可以和显色剂作用,生成有色物质。事实证明,当有色溶液的浓度改变时,颜色的深浅也随之改变。浓度越大,颜色越深;浓度越小,颜色越浅。因此,可以通过比较溶液颜色深浅的方法来确定有色溶液的浓度,对溶液中所含的物质进行定量分析。 溶液颜色的深浅与浓度之间的关系可以用吸收定律来描述。 当一束平行单色光照射到均匀、非散射的溶液时,光的一部分被吸收,一部分透过溶液、一部分被比色皿的表面所反射。设入射光的强度为I0, 吸收光的强度为Ia,反射光的强度为Ir,透过光的强度为It 。则它们之间有如下关系: I0=Ia+Ir+It 在实际比色分析时,所用的比色皿都是同质料、同规格的,所以反射光的强度为一定值,不会引起误差。即反射光的影响可以不加考虑。这正像我们比较两个人的高低一样,无论站在地面上还是站在台子上,两个人的相对高度是不变的。这样,上式可简化为: I0=Ia+It 当入射光的强度一定时,被吸收的光的强度越大,透过光的强度就越小。这就是说:光强的减弱仅仅与有色溶液对光的吸收有关。 在比色分析中,常把透过光的强度占入射光的强度的百分比(It/I0)%) 称为透过率或透射比,用T(或τ)表示。即 T=(It/I0)% 。 T越大,表明有色溶液的透光程度越大。 当一束平行单色光通过稀释的有色溶液时,由于溶液吸收了一部分光线,光线的强度就要减弱。溶液的浓度越大、透过的液层越厚、 入射的光线越强,对光线的吸收就越多。如果入射光的强度不变,则光的吸收只与液层厚度及溶液的浓度有关。它们之间的关系可以用下式表示: A=KCL 式中:A为吸光度, 也被称为消光度E,或光密度D(O.D); K为

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