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体外抗菌药物抑菌试验（亦称细菌对药物的敏感试验-简称药敏试验） 病原生物学实验室 2009 3 4 一、概念 药物敏感试验是在体外检测抗菌药物对细菌的抑制和杀灭的作用。根据药物的常规剂量在体内所能达到的浓度对细菌的影响，将被检菌株对该药的敏感程度分为三级：敏感、中度敏感／中介度、耐药。 敏感(S)：表示细菌可被常规剂量的药物在体内达到的浓度所抑制或杀灭。 中度敏感(MS)：表示细菌可被该药物大剂量的浓度所抑制或在药物生理性浓集的部位被抑制。 只有少数药物可报告中度敏感，如氨苄青霉素测肠球菌。 中介度(1)：是为防止因技术因素失控导致结果误差而设置的“缓冲域”因其临床意义难以确定，故不应向临床医师报告。而应重做稀释法根据MIC结果做出判断。 耐药(R)：表示细菌不能被常规剂量的药物所达到的浓度所抑制。 药物在体外稀释的不同浓度对细菌生长的影响，可分为二种： 最小抑菌浓度(MIC)：抗菌药物能抑制被检菌生长的最小浓度。药物对同一菌株MIC值越小，其抗菌力就越强， 细菌对这种药物就越敏感。 最小杀菌浓度(MBC)：抗菌药物能完全杀灭被检菌所需要的最小浓度。 近年来，广谱和超广谱抗菌药物的应用及滥用，造成耐药菌株数迅速增加，耐药范围不断扩大，导致抗菌治疗效果严重下降，耐药菌引起的内源性感染和医院交叉感染已成为全球性的突出问题。如何指导科学合理地抗菌治疗及耐药监测已成为微生物实验室及临床微生物实验室的重要任务之一。体外检测抗菌药物对细菌的敏感试验作为实验室的主要手段，在临床医学中有着重要的作用。 二、 药敏试验的常用方法 K-B纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂稀释法及 E-test法试验 前面讲过药物对同一菌株，MIC值越小，其抗菌力就越强， K-B法的抑菌圈(环) 就越大，细菌对这种药物就越敏感，这是K-B 纸片扩散法与稀释法的关系，呈负相关。 （一） K-B纸片扩散法 是由Kirby和Bauer所创建，此方法属定性试验，是药敏试验中最成熟的方法之一，但操作时影响因素较多，需注意质控。经世界卫生组织推荐统一实验条件，规定了统一用水解洛蛋白培养基及平板大小，培养基厚度，标准菌株、菌龄及菌浓度，操作手法，纸片质量及厚度，药敏纸片之间距离，观察量取结果时间及工具，为各国广泛采用的方法。 根据本国国情，卫生部临床检验中心还制订了关于临床微生物实验室室内质控要求。临床具体工作须参照遵守。 原理 是将定量抗菌药物纸片贴在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度逐渐递减，使纸片周围的敏感细菌受到抑制生长，形成抑菌圈，测量抑菌圈的直径来判定细菌对药物的敏感程度。此法简单易行、价格便宜、药物选择灵活，适用对生长快的细菌进行药敏试验。 1 水解酪蛋白琼脂（Mueller-Hinton AgarMHA） 倾注成4mm厚的12～15cm平板，将其保存于4℃冰箱可用1周。 2硫酸钡比浊管 1.175%氯化钡（BaCl2 .2H2O）0.5ml加0.36N(1%)流酸溶液99.5ml,充分混匀，每管4ml其浊度相当于0.5麦氏（McFarland standard）比浊管第一管1/2（1.5亿/ml相当于1.5×108CFU／m1）,使用期半年。 3 抗菌素纸片 现有商品（阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GEN)、青霉素(PEN)、苯唑西林(OXA)、氨苄西林(AMP)、氨苄西林／舒巴坦(AMS)、呢拉西林(PIP)、头抱唑林(FZN)、头孢呋辛(FRX)、头孢他啶(CAZ)、氨曲南(ATM)、亚胺配南(1MP)、环丙沙星(CIP)、万古霉素(VAN)、克林霉素(CLI)、复方新诺明(SXT) 4 质控菌 金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、大肠埃希菌（ATCC25922） 5 其它 无菌生理盐水、无菌棉拭、镊子、游标毫微米卡尺、消毒小试管、1ml 、10ml 吸管。 操作方法 1 将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌先接种在血平板或营养平板上，37℃孵育16～24h。 2 再将菌落接种至营养肉汤中，培养4～6小时后用灭菌生理盐水校正菌液浓度至0.5麦氏标准比浊管(相当于1.5×108CFU／m1)。 3 用灭菌棉拭子蘸取相当于1.5×108CFU/m1的金黄色葡萄球菌菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后，在MHA 平板表面上，从不同方向均匀涂布3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1圈。同样方法涂布大肠埃希菌。 平板在室温下干燥3～5min后。根据试验菌株选择抗菌谱。如阳性球菌:金黄色葡萄球菌选择青霉素(PEN)、苯唑西林(OXA) 环丙沙星(CIP)、万古霉素(VAN)、克林霉素(CLI)等。大肠埃希菌选用氨苄西林(AMP)、头抱唑林(