复旦大学研究生课程PPT DNA复制2.ppt

DNA聚合酶 III 形成不对称的二聚体，与DNA双链结合，后随链折叠1800，使后随链的物理方向与主导链一致，同时催化两条链的复制。 DNA 聚合酶 polⅠ polⅡ pol Ⅲ 亚基数目 1 ≥7 ≥10 5 ′→3 ′聚合酶活性 + + + 3 ′→5 ′外切酶活性 + + + 5 ′→3 ′外切酶活性 + - - 聚合速度(核苷酸/分) 1 000-1 200 2 400 15 000-60 000 持续合成能力 3-200 1 500 ≥500 000 功能 切除引物,修复 修复 复制 （三） 真核生物DNA聚合酶  DNA聚合酶?的作用 DNA聚合酶? : 多亚基、多功能酶。 大亚基：DNA聚合酶活性。? 100nt/次 小亚基：引物酶活性，合成RNA。 起始DNA的合成：合成RNA引物和在RNA3’羟基端合成一段DNA。 DNA聚合酶?的作用 DNA聚合酶?的结构 多亚基组成： P125 大亚基，催化亚基，含聚合酶和 外切酶活性 P50 与PCNA结合相关 P66 P12 DNA聚合酶?的功能 主要DNA复制酶：DNA聚合酶活性，延伸DNA链。 ?与RFC和PCNA形成“全酶”，在RFC和PCNA等的协同下，促使DNA聚合酶?的解离， DNA聚合酶?接替DNA聚合酶?继续DNA链的合成------- DNA聚合酶?向DNA聚合酶?的转换。 复制校正功能：3’-5’外切核酸酶活性 DNA聚合酶 ?、? 主要功能：DNA修复。 DNA聚合酶γ：线粒体DNA复制 二、真核生物DNA聚合酶附属蛋白 1、PCNA：增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen)， DNA聚合酶的附属蛋白，参与DNA的合成，类似?二聚体。 2、RFC：复制因子C(Replication Factor C)。多亚基复合物，DNA聚合酶的附属蛋白，识别引物末端,参与链的延长。类似?复合物。 3、PRP1和PRP2 Primer Recognition Protein 增加DNA聚合酶?与模板－引物末端的亲和力，增加DNA聚合酶?的活性。 PCR 与Taq DNA 聚合酶 Taq DNA聚合酶特性（Taq DNA polymerase） 最初由H.A.ErlicH从热泉中的细菌中出来 ?? 性质 具有5’－3’聚合酶活性以及依赖于聚合作用的 外切酶活性 ?? 耐热性 此酶是一种耐热的依赖于DNA的DNA聚合酶 最适反应温度为72℃－80℃ ?? 应用 能以高温变性的靶DNA分离出来的单链DNA 为模板，进行DNA的体外扩增－PCR反应。 三 引物酶 primase DNA聚合酶不能引发DNA新生链的合成，只能在已存在的DNA链或RNA链上延长DNA。引物酶催化引物RNA的合成。 四 连接酶 ligase   1967年发现 催化冈奇片段间磷酸二酯键的形成，二个片段必须都与完整的模板链结合。 大肠杆菌的连接酶需NAD+，真核细胞的连接酶需要ATP。 可连接双链DNA中的单链切口，RNA-DNA杂交体双链单链切口，不能连接双链RNA中的单链切口。 五 与DNA解链和解旋有关的酶 （一）DNA螺旋酶（Helicase） 催化双螺旋解旋和解链 需消耗ATP （二）拓扑异构酶（Topoisomerase) DNA 回旋酶（Gyrase） 促进DNA双链的解开,需消耗ATP。 兼有内切酶和连接酶活性, 可迅速使DNA两条链断开又接上, 消除解链酶产生的拓扑张力。当引入负超螺旋时需要由ATP提供能量, 同复制有关。 （三）单链结合蛋白 DNA单链结合蛋白（Single Strand Binding protein，SSB） 复制因子A 主要功能： 与单链亲和力大，稳定单链结构，保护单链免受核酸酶水