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海马锥体细胞的变化对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响 南京军区福州总医院神经内科 叶建新 前 言 血管性痴呆（vascular dementia，VD）是由于缺血性脑血管病，以及全脑性缺氧缺血而引起的认知障碍痴呆综合征。 本实验通过制作血管性痴呆模型，研究血管性痴呆大鼠海马锥体细胞的变化对痴呆大鼠学习记忆能力的影响。 血管性痴呆大鼠的模型制作 主 要 方 法 一、实验动物 12－14月龄SD大鼠30只，体重（500+ 50）g，雌雄各半。 以Y型电迷宫实验筛选学习记忆良好的大鼠29只，随机分为：实验组，对照组分别为17、12只。 二、模型制作（2-VO法） 对照组同法分离双侧颈总动脉，但不结扎，余处理与实验组相同。 三、模型检测 术后30天进行Morris水迷宫试验以检测模型。 试验包括： （1）定位航行试验； （2）空间探索试验。 四、HE染色 海马组织经冲洗、脱水、透明、浸蜡、包埋，制成5um厚切片，每10张切片取1张行常规HE染色。 五、光镜下（×400）对海马CA1区锥体细胞进行双盲法计数。每张切片取连续的两个视野，取两视野的平均值为该切片锥体细胞数，4张切片的平均值为该样本的锥体细胞数。 结果 一、行为学结果 二、组织学观察 假手术组术后38d大鼠海马结构（×25）。? 永久性结扎双侧颈总动脉术后38d大鼠海马CA1区病变锥体细胞，核固缩，胞浆嗜酸性变，↑示海马CA1区病变锥体细胞（×400） 假手术组大鼠术后38d海马CA1区锥体细胞，↑示海马CA1区锥体细胞（×400）。锥体细胞排列紧密有序，细胞核圆而大，染色浅，核仁清晰。 讨论 建立可复制的可靠动物模型是研究血管性痴呆发生发展机制及治疗、防治的关键。本实验采用2-VO法持久性双侧颈总动脉结扎，造成稳定的不完全性前脑缺血，造成脑供血大幅度下降，更接近慢性脑灌注不足时脑组织病理生理演变过程。 脑的幕上部分血流减少，而脑干灌注良好，维持生命中枢的基本功能。适用于慢性研究。 血管性痴呆大鼠与正常大鼠相比海马锥体细胞有损伤，海马微环境有改变，如解剖结构、神经营养因子、神经递质以及在学习记忆活动中动作电位的不同可能对细胞的存活、迁移和分化起重要影响。 实验表明VD大鼠的学习记忆能力与海马锥体细胞数量减少以及细胞间突触的结构和功能下降有关。 研究发现，2-VO法模型制作手术后7天，实验大鼠即出现明显的学习记忆障碍。空间定位、识别能力损伤较为严重，形态学观察VD大鼠CA1区锥体细胞出现变性、死亡、丢失。 本实验手术组大鼠海马锥体细胞较对照组明显减少，表明血管性痴呆大鼠海马锥体细胞缺失导致大鼠学习记忆能力的改变，因此海马锥体细胞减少对大鼠学习记忆能力下降起到重要影响。 结论 老龄大鼠双侧颈总动脉结扎能较好地模拟人类VD的发病机制，并从形态学上提供了VD患者海马区锥体细胞出现变性、死亡、丢失的证据。 参考文献 [1] 赵小贞，王玮，康仲涵等。血管性痴呆大鼠学习记忆障碍与海马突触界面结构参数改变的相关性研究[J].现代康复，2001，5（6）：54－55。 [2] Ohta H,Matsumoto K,Watanabe H.Progressive cognitive impairment following chronic cerebral hypoperfusion induced by permanent occlusion of bilateral carotid arteries in rats[J]. Brain Res, 1994,653(1):231-234。 [3]Zhang JT, Guan LC. Modern Experimental Methods in Pharmacology.Beijing:Peking Union College and Beijing Medical University United Press,1998:1021-1024. [4]Pulsinelli WA,Brierley JB.A new model of bilateral hemispheric ischemia in the unanesthetized rat[J].Stroke,1979,10(3):267. [5]Smith ML,Bendek G,Dahlgren N,et al.Models for studying long-term recovery following forebrain ischemia in