生化研究技术与方法 -1沉淀法27PPT.pptVIP

南京农业大学 生命科学学院;第二章 沉淀法;*;第一节 沉淀的基本原理;第一节 沉淀的基本原理;*;*;第二节 蛋白沉淀法;第二节 蛋白沉淀法;硫酸铵盐析 固体法 g = 533(S2-S1)/(100-0.3S2) (20 ℃) g = 541(S2-S1)/(100-0.3S2) (20 ℃) g：1升溶液中需加入固体硫酸铵的克数 S1：表示需要达到的百分饱和度 S2：表示原溶液中的百分饱和度 饱和溶液法 V = V0(S2-S1)/ (S3-S1) V ：表示需要加入的硫酸铵溶液体积（ml） V0 ：表示原来溶剂的体积（ml） S1与S2同上 S3 ：表示需要加入的硫酸溶液的饱和度;硫酸铵分级沉淀示例： 各溶解度区段的沉淀效果（尿素酶）：;*;第二节 蛋白沉淀法;盐析的影响因子： pＨ对盐析的影响：蛋白质所带净电荷越多，溶解度越大；在净电荷为零时，溶解度最低。一般将pＨ值调到蛋白质等电点附近，这样有利于盐析。 温度对盐析的影响：在低离子强度或水中在一定范围内蛋白质的溶解度随着温度的升高而增加；但在高盐溶液中，温度的升高有时反而下降。一般情况下在０~４℃操作。 其他：在进行盐析沉淀时，有时需在溶液中加入一定量EDTA，以除去沉淀剂中带入的金属离子。再者是加硫酸铵的时间要控