生物化学 第11章 RNA的生物合成 2012PPT.ppt

真核生物RNA聚合酶的结构比原核生物复杂，所有真核生物的RNA聚合酶都有两个不同的大亚基和十几个小亚基. RNA聚合酶Ⅱ由12个亚基组成，其最大的亚基称为RBP1。 RNA聚合酶Ⅱ最大亚基的羧基末端有一段共有序列(consensus sequence)为Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser的重复序列片段，称为羧基末端结构域(carboxyl-terminal domain, CTD)。 CTD对于维持细胞的活性是必需的。 羧基末端结构域 (carboxyl-terminal domain, CTD) RNA聚合酶Ⅱ最大亚基的羧基末端有一段共有序列为Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser重复序列片段 这一序列在RNA 聚合酶Ⅱ中是独一无二的。 所有真核生物的RNA聚合酶Ⅱ都具有CTD，只是共有序列的重复程度不同。 去磷酸化的CTD在转录起始中发挥作用。 磷酸化的CTD在转录延伸中发挥作用 RNA聚合酶Ⅱ 最大亚基CTD-P 在转录延伸中发挥作用 RNA聚合酶Ⅱ 最大亚基 CTD在转录启始中发挥作用 磷酸酶 激酶 二、真核转录起始需要启动子 、RNA聚合酶和转录因子的参与 （一）转录起始前的上游区段具有启动子核心序列 不同物种、不同细胞或不同的基因，转录起始点上游可以有不同的DNA序列，但这些序列都可统称为顺式作用元件(cis-acting element)。 顺式作用元件包括启动子、启动子上游元件(upstream promoter elements)或promoter-proximal elements)等近端调控元件和增强子(enhancer)等远隔序列。 起始点上游多数有共同的TATA序列，称为Hognest盒或TATA盒(TATA box)。通常认为这就是启动子的核心序列。 一个典型的真核生物基因上游序列: 5’ 3’ 调控序列 TATA盒 Inr YYAN YY T A -30 +1 TATAAA 许多RNA聚合酶II识别的启动子具有保守的共有序列：位于转录起始点附近的起始子(intiator，Inr) 。 启动子上游元件是位于TATA盒上游的DNA序列，多在转录起始点约-40～-100nt的位置，比较常见的是GC盒和CAAT盒。 增强子是能够结合特异基因调节蛋白， 促进邻近或远隔特定基因表达的DNA序列。 转录起始点 TATA盒－25 bp CAAT盒－75 bp GC盒－110bp 增强子 顺式作用元件(cis-acting element) AATAAA 切离加尾 转录终止点 修饰点 外显子 翻译起始点 内含子 OCT-1 OCT-1：ATTTGCAT八聚体 （二） 转录因子 能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，现已发现数百种，统称为反式作用因子(trans-acting factors)。 反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为转录因子(transcriptional factors, TF)。 参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ 基因基础转录:是由核心启动子与通用转录因子结合后起始转录过程。只含有通用转录因子和上游因子识别序列的启动子可在各种细胞类型中发挥作用，可以开始转录但其速率低。 如TBP支持基础转录 能被诱导表达的基因启动子:该启动子能被诱导物直接激活，或诱导物与启动子上的阻遏物结合，从而间接激活该启动子的转录。 TAFs对诱导引起的增强转录是必要的. Ⅱ型基因中的四类转录因子 转录因子 具体组分 结合序列 功能 基本组分 TBP,TFⅡA,B,E,G,F和H TBP结合TATA盒 转录起始定位； 转录起始和延长 辅激活因子 TAFs和中介子 在可诱导因子和上游因子与基本转录因子、RNA聚合酶结合中起联结和中介作用 上游因子 SP1、ATF、CTF等 启动子上游元件 协助基本转录因子，提高转录效率和专一性 可诱导因子 如MyoD、HIF-1等 增强子等远隔调控序列 时间和空间（组织）特异性地调控转录 （三） 转录起始前复合物 真核生物转录分四个时期: 装配期(RNA聚合酶Ⅱ和通用转录因子形成 闭合复合体) 启始期 延长期 终止期 真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子，形成转录起始复合物(pre-initiation complex, PIC) 。 需有关蛋白质参与 PIC装配顺序 2.TFⅡB -TBP -DNA复合体