中国药科大学-色谱分析法概论（胡育筑）.pptVIP

试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。 一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。 GLC ┌─ 填充柱色谱法 气相色谱法 ─ GSC (GC) └─ 毛细管柱色谱法 经典液相柱色谱法─── LLC 柱色谱法 （LC） ── LSC 色谱法 ── IEC 高效液相色谱法 ─── SEC (HPLC) ─ LSC 薄层色谱法 (TLC) LLC 液相色谱法 平板色谱 SEC (LC) 纸色谱法 （PC） └──── 毛细管电泳法 (CE) 超临界流体色谱法 (SFC) 2. 保留值 试样中各组分在固定相内的滞留状态，是主要的色谱定性参数。 保留值通过实验测定，用时间或相应的流动相体积表示，称为保留时间和保留体积。 ⑴ 保留时间 tR （min） ⑵ 保留体积 VR （mL） ⑹调整保留体积VR‘：保留体积与死体积之差， 其本质为组分停留在固定相时所消耗流动相的体积 与流动相流速无关 和tR ‘ 同属于色谱定性参数 V0 和 Vm、t0 和 tm 的区别 由进样器至检测器的流路中未被固定相占有的空间体积称为V0 ； 固定相充满死体积所需的时间 为t0 。 平衡时流动相在色谱柱中占有的体积用Vm表示，经过色谱柱所需时间用tm 表示。 物理意义有区别 Vm ≤ V0，tm≤ t0 。 在多数情况下，可忽略导管和检测器内腔容的容积，视为近似相等。 ：指将待测物的保留行为换算成相当于正构烷烃的保留行为(已知范围内组分的定性参数)。 Ix: 待测组分的保留指数，z与z+n为一对正构烷烃的含C数，一般n为1。t’R(X) 应介于t’ R(Z)和 t’ R(Z+n)之间。 容量因子k 的计算 3. 色谱分离的基本理论3.1 分配系数与保留行为的关系 例：某色谱柱的Vs=1.3 mL、V0=2.1 mL，分离A、B 两物质KA=10.0、KB=40.0。试计算A、B的保留 体积。 解：设V0=Vm，则VR=V0(1+K·Vs/Vm)=V0+KVs， 可得：VR(A)=15.1 mL VR(A)B =54.1 mL 3.2 等温线 在一定条件下，组分在固定相和流动相间分配达到平衡时，在两相中的浓度cs和cm的比值K为常数，由此绘制出的cs和cm的关系曲线显然应为一条直线，被称为等温线。 线性等温线为正常峰 凸形等温线，产生拖尾峰； 凹形等温线，产生前延峰 一般使用对称性因子(symmetry factor) 评价色谱峰的对称性。对称因子的计算式为 中国药典2005年版: 拖尾因子 设 理论塔板数 n ——组分流过色谱柱时，在两相间进行平衡分配的总次数 理论塔板高度 H ——为使组分在柱内两相间达到一次分配平衡所需要的柱长 塔板理论的特点 塔板理论的局限性 ⑴柱效不能表示被分离组分的实际分离效果，当两组分的分配系数K相同时，无论该色谱柱的塔板数多大，都无法分离。 ⑵塔板理论无法解释同一色谱柱在不同的载气流速下柱效不同的实验结果，也无法指出影响柱效的因素及提高柱效的途径。 B/u —纵向扩散项： 3.5 影响分离度的因素 4. 基本类型色谱法的分离机制 4.2 分配色谱（液-液分配色谱）：早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相, 现多为化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。 4.4 分