玉米两种尿卟啉原脱羧酶基因克隆及催化底物酶促合成.pdfVIP

摘 要 尿卟啉原脱羧酶(Uroporphyrinogen 素和光敏色素的生色团分支合成关键酶，催化尿卟啉原III脱羧产生粪卟啉原III。高等 植物含两种UROD。已发现UROD是氧化还原信号主要传递者硫氧还蛋白调节的靶 蛋白，但是否调节两种UROD尚不清楚。研究硫氧还蛋白调节UROD的分子机制， 阐明植物四吡咯分子合成与氧化还原信号之间的关系，具有重要意义。UROD的底物 尿卟啉原III易分解，其上游中间物5．氨基酮戊酸稳定性好。本文利用大肠杆菌重组表 达系统，研究了玉米两种重组UROD的表达、纯化和活性。具体结果如下： server的ChloroP1．1软 1．根据已公布的玉米编码UROD的序列，使用Expasy V 酸残基，Ar927为UROD2的第一个氨基酸残基，运用NEBcutter2．0分析玉米两种 UROD所编码的成熟蛋白的限制性内切酶位点，设计引物。利用Trizol法提取玉米 因有5处突变，利用定点突变试剂盒，将突变位点恢复成野生型；UROD2编码基因 有1处