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蛋白水解酶分为 丝氨酸蛋白酶： 酶的活性中心有丝氨酸残基，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶 含硫的蛋白酶： 活性中心有半胱氨酸，如木瓜蛋白酶 含羧基的蛋白水解酶： 如胃蛋白酶 酶活化中心的必需基团 DIFP能使乙酰胆碱酯酶（一种丝氨酸蛋白水解酶）失活。乙酰胆碱酯酶的作用是使乙酰胆碱水解成乙酸和胆碱。 乙酰胆碱是一种神经传导物质，本身具有很高的毒性，完成传递任务后必须立即被水解成无毒的乙酸和胆碱。DIFP的存在，使乙酰胆碱酯酶不可逆失活，导致乙酰胆碱在生物体内累积，引起中毒死亡。 具有类似DIFB的化合物还包括一些著名的有机磷杀虫剂，如对硫磷、马来硫磷(结构式书p112) 丝氨酸蛋白酶的空间结构 牛的胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、猪的弹性蛋白酶结构相似，40%相同 由240个氨基酸残基组成 活性中心的必需氨基酸相同（Ser, His, Asp)。 丝氨酸蛋白水解酶催化作用机制 （1）胰凝乳蛋白酶活性中心的结构特性 Ser-195, His-57,Asp-102空间排列位置有利于通过氢键形成一个具有高度催化活性的区域-“催化三元区” （2）亲核共价催化作用:  分三步反应 反应的第一步： 酶中“催化三元区”的Ser-195羟基对底物肽键的酰基亲核进攻，形成一个包括Ser-195的羟基、底物酰基、氨基在内的共价四面体中间体。 反应的第二步： 四面体的中间物分解形成另一个中间物，并伴随C-N键的断裂。肽键断裂后，R1NH2从酶中离去，其位置被水溶液中的水分子取代。 胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶的结构与它们的水解选择性 4.5 酶的抑制作用和抑制剂 酶的抑制作用：某些化合物能与酶相互作用，使酶分子中的活性基团发生变化，从而影响酶与底物分子的结合或减小酶的再生速率，使酶的活性降低或丧失的现象，称为酶的抑制作用。 抑制剂：能够引起酶的抑制作用的化合物称为抑制剂。 抑制剂的特点 化学结构上，与被抑制的底物分子或底物的过渡态相似 能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合体。 抑制剂的作用方式 不可逆抑制：抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶的永久失活。 不可逆抑制作用 可逆抑制的分类 竞争性抑制 某些抑制剂的化学结构与底物相似，能与底物竞争与酶活性中心结合。 消除办法：增大底物浓度，提高底物的竞争能力来消除。 非竞争性抑制： 某些化合物能与酶的调控部位结合，引起酶分子构象变化，导致酶活性下降。 如，某些金属离子(Cu2+,Ag+,Hg2+)以及EDTA等，能与酶分子调控部位的-SH作用，改变酶的空间构象。 可逆抑制 可逆抑制作用的动力学特征 竞争性抑制作用的动力学特征 非竞争性抑制作用的动力学特征 作业 P141.7,8和11 思考题 一、选择题 1. 酶的非竞争性抑制剂对酶促反应的影响是： A、Vmax不变，Km增大 B、Vmax不变，Km减小 C、Vmax增大，Km不变 D、Vmax减小，Km不变 2. 按照典型的米氏动力学公式，米氏常数Km 值可以从反应速度对底物浓度所作的双倒数图形中的哪一项求得，（ ） A．曲线的折点 B．曲线的斜率 C．曲线在X 轴上的截距的绝对值 D．曲线在X 轴上的截距的绝对值的倒数 填空题 ＿＿＿是生物催化剂，它所催化的反应物质称为＿＿＿，它所催化的化学反应称为＿＿＿。 根据酶的分子结构可将酶分为＿＿＿和＿＿＿。 全酶由＿＿＿和＿＿＿组成。 每一种酶均有＿＿＿和＿＿＿，两个名称。 活性中心按其功能可分为＿＿＿和＿＿＿两个部位． 酶的化学本质主要是＿＿＿，催化本质是＿＿＿。 三、问答题 试比较酶的竞争性抑制作用与非竞争性抑制作用的异同。 3．若以某酶的米氏方程的双倒数作图法得直线1/V=(Km/Vmax)·(1/[S])+1/Vmax 在X 轴上的截距为-3，Y 轴上的截距为2，那么，该酶的Km 值是：（ ） A．-0.25 B．-0.50 C．＋0.25 D．十0.33 4.具有绝对专一性的酶是：（ ） A．酯酶 B．胰蛋白酶 C．脲酶 D．过氧化氢酶 5.下列属于不可逆抑制剂的是。（ ） A．丙二酸 B．戊二酸 C. 二异丙基氟磷酸 D．亮氨酸 6. 结合酶类的特点是：（ ） A．辅酶种类很多，酶蛋白种类少 B．一种酶蛋白可以与多种辅酶结合 C．酶蛋白与辅酶组成全酶时才有活性 D．酶蛋白决定催化反应的类型 7．对于侧链带正电荷的氨基酸羧基旁边的肽键具有最强的专一性的酶是：（ ） A．羧肽酶 B．糜蛋白酶 C．胰蛋白酶 D．凝乳蛋白酶 8.下列有关Km 的