壳寡糖对S180荷瘤鼠Bcl-2、Bax蛋白表达影响.docVIP

壳寡糖对S180荷瘤鼠Bcl-2、Bax蛋白表达影响 　　[摘要] 目的 观察壳寡糖对S180小鼠Bcl-2、Bax蛋白表达情况及肿瘤细胞凋亡的影响。 方法 选择体内注射的方法将壳寡糖注入S180小鼠体内，用免疫组织化学法测定瘤组织Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。 结果 壳寡糖能降低S180小鼠瘤组织抑凋亡基因Bcl-2的表达，提高促凋亡基因Bax的表达。 结论 通过调节Bcl-2、Bax的表达而诱使肿瘤细胞凋亡是壳寡糖抗肿瘤作用机制之一。 　　[关键词] 壳寡糖；S180小鼠；Bcl-2；Bax；凋亡 　　[中图分类号] R392 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）05（a）-0027-02 　　壳寡糖由甲壳质（几丁质）脱乙酰化的产物壳聚糖降解获得，是由2～10个氨基葡萄糖通过β-1-4糖苷键连接而成的低聚糖，它不但水溶性好，容易被人体吸收，并且具有多种生理活性和功能，主要表现在：能够调节动物肠道内微生物代谢活动，有选择的活化有益菌，增强有益菌生长[1]；促进抗体生成、抑制肿瘤生长[2]；降低血压、血糖、吸附胆固醇；活化植物细胞、促进植物细胞快速增长等[3]。本文以S180荷瘤鼠作为研究对象，通过体内实验，观察壳寡糖对肿瘤细胞的诱导凋亡作用，探讨壳寡糖抗肿瘤作用机制，为壳寡糖临床应用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要仪器及试剂 　　壳寡糖由哈尔滨工业大学提供；环磷酰胺由上海华联制药有限公司生产；Bcl-2、Bax单克隆抗体，由上海长岛试剂公司生产；二步免疫组化检测试剂盒，由北京中杉金桥生物技术有限公司生产。超净工作台、微波炉、吹风机、湿盒、烤箱、振荡器、染缸、光学显微镜，由齐齐哈尔医学院检验实验中心提供。 　　1.2 实验动物及细胞株 　　昆明小鼠，雌雄各半，质量18～22 g，由哈尔滨医科大学第三临床医院提供；S180瘤株，由哈尔滨医科大学免疫教研室提供。 　　1.3 实验动物分组及给药方法 　　取腹腔接种S180瘤株10 d的荷瘤小鼠，在无菌条件下抽取腹水，放入无菌容器内，置冰块保存。用0.4%台盼蓝生理盐水液计数（其活细胞大于95%）。用生理盐水调细胞浓度至1×108/mL，备用。取小鼠40只，将其随机分为对照组、模型组、壳寡糖组（15 mg/mL）、环磷酰胺（CY）组，每组10只。除对照组外，其余各??均造模，每只小鼠右腋下皮下注射0.2 mL瘤细胞悬液制备动物模型。对照组、模型组用生理盐水腹腔注射，每日0.02 mL/g；壳寡糖组用壳寡糖（15 mg/mL）给小鼠腹腔注射，每日0.02 mL/g；环磷酰胺组于小鼠腹腔注射CY，每日20 mg/kg。各组小鼠均于接种后次日给药，每日给药1次，连续10 d。 　　1.4 免疫组织化学技术检测Bcl-2、Bax蛋白表达 　　脱颈椎处死小鼠，剥离肿瘤组织，10%甲醛固定，常规处理，石蜡包埋，连续组织切片4～6 μm，二甲苯脱蜡至水。免疫组化染色采用两步法，其步骤严格按照试剂盒要求进行。染色结果判定：Bcl-2和Bax染色阳性标志为棕黄色颗粒，Bcl-2主要表达在细胞核或胞浆，Bax主要表达在胞浆。光镜高倍镜观察，随机选择10个视野，计算1 000个细胞的阳性细胞数。 　　1.5 统计学方法 　　采用统计软件SPSS 11.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。以P 0.05）。见表1。 　　2.2 各组间小鼠Bax表达水平测定 　　与模型组比较，壳寡糖组和环磷酰胺组瘤组织中Bax蛋白表达水平均升高（P 0.05）。见表2。 　　3 讨论 　　壳寡糖具有低毒、易溶解、易吸收、使用方便等优点，广泛应用于医药、食品、农业、化妆品等各个领域[4]。在医药领域，壳寡糖主要用于抗肿瘤、抗感染、降低血清胆固醇等；在食品领域，以壳寡糖为主要原料生产的保健品有提高机体免疫力、活化细胞、促进肠道双歧杆菌等有益菌的增生，并抑制有害菌的生成等；在农业领域，壳寡糖作为农作物防治剂、植物调理素或新型饲料添加剂等，资源丰富，无毒副作用，前景广阔。我国对壳寡糖的研究比较多地集中在其制备及组分分析方面，对其抗肿瘤作用的研究报导较少，关于壳寡糖抑制肿瘤的实验研究，本课题前期工作结果总结为：壳寡糖可抑制肿瘤生长，提高机体免疫功能，同时壳寡糖可诱导肿瘤细胞凋亡[5]。 　　凋亡是细胞在基因调控下的一种主动性死亡。细胞的增值、分化和凋亡相互协调，维持着正常组织的生长平衡。细胞凋亡过程受凋亡相关基因的调控，其中Bcl-2基因家族备受关注[6]。Bcl-2即B细胞淋巴瘤/白血病基因2（B-CELL lymphoma/leukemia 2），Bax属Bcl-2相关基因。Bcl-2抑制细胞凋亡的主要