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影响血常规检验标准化操作因素 　　血常规检验不仅是诊断各种血液病的主要依据，而且对其他系统疾病的诊断和鉴别也可提供重要的信息，是临床医学检验中最常用、最重要的基本内容之一，因此，血常规检测准确与否致关重要。本文的目的是从标本采集，抗凝，血球仪分析，血涂片制备染色，复片五方面来阐述血常规标准化检验在检测中受影响的因素，以提高检验质量的准确性和可靠性。检验者在实验室检验中，要充分考虑影响血常规检验的各种因素，严格质量控制、标准化操作、减低误诊、漏诊，提高诊断水平。 　　标本采集操作的标准化 　　在自动化仪器普遍应用的现代实验室，血液标本的正确采集和处理是获得可靠检验结果的关键，也是分析前质量控制的主要内容。血常规标本的采集，可分为毛细血管采血法和静脉采血法，一般要求用静脉采血法，因为静脉采血不易受取血部位的皮肤、环境温度的影响。而毛细血管标本，受末梢血循环状态、采血技术的影响，有时血液易形成小凝块，堵塞机器造成实验结果偏差1。对于少数取静脉血有困难的患者，如婴幼儿、大面积烧伤的患者或需频繁采血进行检查的病例，可采用毛细血管采血法，且采集末梢血更易被患者接受，一些基层医疗单位末梢采血也是很普遍和实用。就WBC、RBC检测静脉血与末梢血，两者结果差异无显著性2。为了避免瘀血和浓缩，压脉带压迫时间不可过长，一般应2分钟，大静脉血流受阻使毛细血管内压力增高，血管内血液与组织液交换，能使相对分子量3。除采血因素的影响，多数情况下，采血量取决于血液和抗凝剂的比例，血液比例过高时抗凝剂相对不足，血浆中出现微凝血块的可能性增加。在用于血细胞分析仪时，微凝血块可能阻塞仪器，同时影响一些检验指标；血液比例过低，抗凝剂相对过剩，对检验指标会造成严重影响。血液经EDTA抗凝后，白细胞的形态会发生改变，这种改变和时间及EDTA浓度有关。如果血样少，EDTA的浓度达到2.5mg/ml，中性粒细胞肿胀、分叶消失，血小板肿胀、崩解、产生血小板大小的碎片，这些改变都会使血常规检验细胞计数得出正确结果。必须严格执行卫生行业标准文件“真空采血管及添加剂”的使用。 　　血细胞分析仪计数的标准化 　　懂得如何进行室内和室间质控，正确判断和分析失控原因，定期进行仪器的清洁、保养和维护。血液标本采集后在室温，必须4小时内检测，手动上机前一定要将血液标本颠倒混匀≥8次。如需制备血涂片，应在采血后3小时内涂制。血液分析仪，只能当作一种过筛手段，至今血液分析仪尚不能完全替代人工显微镜对各类血细胞的识别和分类镜检，因为仪器还不能准确区分幼稚细胞、异常淋巴细胞和有核红细胞等。因此，当出现白细胞、红细胞及血小板明显升高或降低，白细胞分血球仪操作的标准化，是分析中质量控制的主要内容，必须熟悉检验理论和操作的标准类出现异常结果，白细胞、红细胞及血小板直方图或散点图出现异常，为了保证血液分析仪检测结果的真实性和提供临床诊断价值，还须进一步用显微镜涂片复检进行验证，各实验室必须制定适合本实验室的复检规则。 　　血涂片制备的标准化 　　血涂片既可由非抗凝的静脉血和毛细血管血制备，也可由DETA-K2抗凝血制备，EDTA-K2抗凝血中，钙离子被螯合后，能阻止血小板聚集，推片时血小板均匀平均，显微镜下易于对血小板进行观察评价，但有时可观察到因EDTA-K2引起的红细胞皱缩、白细胞丛集、诱发血小板假性聚集现象，推荐使用非抗凝血制备血涂片，这样可减少因抗凝剂所致的人工假象。每次必须用清洁的推片，以免异常细胞相互污染，如果血涂片制备不良，染色不佳，常使血细胞的形态学鉴别和诊断发生困难。制作质量合格的血涂片，外周血采样时，擦去第1滴血，迅速采集绿豆样大小血滴，用熟练的推片技术推成长度为25～35mm，宽度18～20mm的血片，迅速摇干以免血细胞皱缩，终尾离玻片终端至少10mm，均匀薄如舌样，头体尾分明、细胞分布均匀、边缘整齐且留有空隙。涂片的好坏与血滴大小、推片与载片之间角度有关，血膜分布不均主要是推片边缘不齐，用力不均或载玻片不清洁所致，要求使用清洁中性的玻片。 　　血涂片染色的标准化 　　血涂片染色检查严格按《全国临床检验操作规程》中SOP（标准化）操作程序进行；血涂片染色的质量直接影响细胞形态识别和检验结果。血涂片制成后尽快固定染色，首选瑞特-姬姆萨复合染液对血涂片进行染色，以免溶解和退变。染色过深，过浅与涂片中细胞数量，血膜厚度，染色时间，染液浓度，甲醛质量，pH密切相关。瑞氏-姬姆萨混合染色，两种染色法各有其优缺点，故在细胞学检查中常将两者结合起来，取长补短，细胞的胞质、颗粒、核等染色均较满意。染色环境的pH对着色影响很大，应维持在pH值6.4～6.8，pH4，必须认真观察分析血涂片，选择涂片的体尾交界处染色良好的部分，在油镜下按一定方式有规律地移动视野，一般计数100～200个白细胞，