毛细管气相色谱法测定保健食品中大蒜素含量.docVIP

毛细管气相色谱法测定保健食品中大蒜素含量 　　【摘要】目的建立气相色谱法测定保健食品中大蒜素含量的检测方法。方法采用正交试验法，对保健食品中大蒜素的提取条件进行了优化，并采用气相色谱法测定其含量。结果正交结果表明，选取提取时间30min，料液比1：4，提取次数2次为最佳提取条件。大蒜素的检测浓度在0.0591-0.3546mg·mL-1范围内呈良好的线性关系，平均回收率为96.11%，RSD=1.39%。用本法测得保健食品中大蒜素的含量为0.3757mg·g-1。结论采用气相色谱法测定保健食品中大蒜素含量，该方法简便快速，结果准确可靠，可作为该保健食品中大蒜素含量的测定方法。 　　【关键词】大蒜素；毛细管气相色谱法 　　大蒜（Garlic）为百合科葱属植物蒜的鳞茎，性温味辣，具有抗菌、消炎、祛风止痢功效，它的药用价值主要在于大蒜素（Allicin）［1］。大蒜素具有广泛的药理活性，如抗肿瘤、降低胆固醇、抗血小板聚集、预防心血管疾病、降血压、抗氧化、护肝等等［2-3］。近年来，随着大蒜类保健食品的开发利用，国内外对大蒜素的研究也越来越深入，大蒜素含量已成为评价该类保健食品功效成分的重要指标。本文采用毛细管气相色谱法测定保健食品中大蒜素的含量。 　　1材料与试剂 　　KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AgilentHP6890N气相色谱仪（Agilent公司），附氢火焰离子化检测器（FID）。 　　保健食品（自制）；大蒜素标准品（以C6H10S3计，含量为88.4%，中国食品药品检定研究院）；苯乙酮（天津市大茂化学试剂厂）；无水乙醇、甲醇、正己烷（天津市富宇精细化工有限公司）；丙酮（上海试剂总厂）；实验所用试剂均为分析纯。 　　2方法与结果 　　2.1色谱条件色谱条件：HP-55%PhenylMethylSiloxane毛细管柱（30.0m×320μm×0.25μm）；进样口温度：250℃；检测器温度：250℃；升温程序：50℃保持1min，40℃·min-1升至140℃，再以25℃·min-1升至200℃，保持2min；分流比：10：1；进样量：0.4μL。 　　在此条件下分别吸取标准工作液和样液进样，得到大蒜素标准品及保健食品的气相色谱图，见图1。以色谱峰保留时间定性、峰面积内标法定量。 　　2.2溶液的制备 　　2.2.1苯乙酮内标溶???的配制精密称取苯乙酮0.1041g于100mL容量瓶中，用无水乙醇：正己烷（体积比4：1）［4］溶解配制成1.041mg·mL-1的内标储备液，静置过夜，备用。 　　2.2.2对照品溶液的配制精密称取大蒜素标准品0.0591g于10mL容量瓶中（按C6H10S3计，精确到0.0001g），用无水乙醇：正己烷（体积比4：1）定容，配制成5.91mg·mL-1的对照品储备液。 　　2.3提取条件的确定 　　2.3.1正交实验考察保健食品中大蒜素的最佳提取条件影响保健食品中大蒜素提取率的因素主要有提取时间、提取温度、料液比等［5］，下面以提取时间（A）、料液比（B）、提取次数（C）三个因素作为考察因素，选用L9（34）正交表进行实验，以确定最佳提取条件。因素水平见表1。 　　采用SPSS软件对正交结果进行方差分析，A1B2C1为最佳提取条件，即提取时间为30min，料液比1：4，提取2次为保健食品中大蒜素的最佳提取条件。 　　2.3.2供试品溶液的制备［6-7］精密称取供试品4.0050g，根据上述优化的条件提取，离心得到提取液置25mL容量瓶中，再加入1.0mL内标储备液，定容，即得供试品溶液。 　　2.4标准曲线的绘制精密量取对照品储备溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL，分别置于10mL容量瓶中，再分别精密加入1.0mL内标储备液，用无水乙醇：正己烷（体积比4：1）定容，摇匀。按“2.1”项下色谱条件测定，进样量0.4μL（n=6），测定大蒜素和苯乙酮的峰面积，得回归方程：Y=0.1617X+0.0379，r=0.99995，表明大蒜素的浓度在0.0591-0.3546mg·mL-1范围内，大蒜素和苯乙酮的浓度之比（C/Cs）与大蒜素和苯乙酮的峰面积之比（A/As）呈良好的线性关系，标准曲线见图2。 　　2.5方法学考察按“2.1”项下色谱条件，精密吸取同一浓度对照品工作液，连续进样6次，结果求得RSD=1.89%，可说明该方法精密度良好。精密吸取供试品溶液，连续进样5次，求得RSD=2.47%，说明重复性良好；分别在0、0.5、1.0、1.5、2.0h内进样，求得RSD=0.39%，说明该溶液至少在2.0h内稳定。 　　精密量取已知质量浓度的供试品溶液1.0mL五份于10mL容量瓶中，再分别加入0.1mL对照