02-2014级硕士高级免疫学实验技术-WesternPPT.ppt

吉林大学基础医学院免疫学教研室 吉林大学基础医学院免疫学教研室 高级免疫学实验技术 2014级硕士研究生 吉林大学基础医学院 免疫学系 免疫印迹Western blotting Western blotting 是一种在固相膜上如硝酸纤维素(NC)膜进行的抗原抗体反应。蛋白质经过电流作用后，可以从胶转移至膜上，再与特异性抗体孵育，洗去游离的抗体，然后和酶标记的二抗孵育，再进行底物显色。由于抗原抗体反应特异性好，亲合力高，Western blotting检测的灵敏度较高。 物品准备 试剂分配：1套/室 器材、仪器：1套/室 丙烯酰胺(ACR) 待测蛋白(OVA ) 塑料盒 加样器头 电泳仪 TEMED 考马斯亮兰染液 手 套 加样器 电泳槽 浓缩胶缓冲液 封闭液 (3%BSA) 封口胶条 小烧杯 半干式电转印仪 分离胶缓冲液 上样缓冲液 夹 子 刀 片 硝酸纤维素膜 AP(fresh) 一 抗(兔抗OVA抗体) 梳 齿 玻璃板 蒸馏水 二 抗(HRP-DaR) 平头镊 子 5ml吸管 电泳缓冲液 洗 液 滤纸条 吸水滤纸 转移缓冲液 实验步骤 SDSProtein Blotting Immuno-Detection SDS实验步骤 组装两块玻璃板，配制分离胶。(见后)。 灌胶：先灌分离胶，胶量大约在梳子下1cm处，缓缓加dH2O 封盖，在室温下聚胶30min。 倒