04-核酸化学PPT.ppt

二、核酸的分离 目前最常用的为酚提取法：即用缓冲液饱和的酚溶液直接处理组织或细胞，以除去其中的蛋白质和DNA。 若加入适量十二烷基硫酸钠或其它去污剂可进一步抑制核糖核酸酶，并使蛋白质去除得更加干净。 将得到的RNA提取液用乙醇反复沉淀数次，溶解后进行透析，再冷冻干燥。 提取不同种类的RNA时，也可将各种亚细胞部分事先分开（因为不同种类的RNA存在于细胞中的不同部位），然后分别从核蛋白体中提取rRNA，从多核蛋白体中提取mRNA，从去除这些成分及其它颗粒后的细胞液中提取tRNA。 二、核酸的分离 1、密度梯度离心法 2、柱层析法 3、凝胶电泳法 二、核酸的分离 离心管中放30% ～5%的蔗糖溶液。 欲分离RNA溶液放在蔗糖溶液面上。 经高速离心数小时后，分子大小不同的RNA即分散于不同密度的蔗糖部位中。 应用啡啶溴红－氯化铯密度梯度平衡超离心，可分开不同构象的DNA、RNA和蛋白质。 1、密度梯度离心法 5％蔗糖 10％蔗糖 20％蔗糖 30％蔗糖 石蜡油 蛋白质 开环形及线性DNA 闭环形质粒DNA RNA 用垂直转头65000转6h，角转头45000转36h。 离心后，蛋白质在最上面，RNA沉淀在底部，超螺旋DNA沉淀较快，开链或环形DNA沉淀较慢。 此法分离的DNA纯度较高，可供DNA重组等实验用。如需更纯品，可再进行一次氯化铯密度梯度离心。 2、柱层析法 常用的支持体为二乙