07研-基因操作1PPT.ppt

使用注意： 保存-20?-80℃冰箱； 反应温度大多数为37℃； 反应时间通常为1小时，延长反应时间可减少酶的用量； 酶量不超过反应体系的10%； 双酶切时注意反应缓冲液条件，差距大时，分步酶切; EDTA 可鏊合镁离子，从而可终止酶切反应，终止浓度为 10mM ，或加热。 DNA聚合酶 复制（DNA Replication）: 亲代DNA双链分子(D.S DNA)在DNA聚合酶的作用下，分别以每单链DNA分子(S.S DNA)为模板，聚合与自身碱基可以互补配对的游离的dNTP，合成两条与亲代分子完全相同的子代DNA分子的过程。 DNA 5’ …ATGACTG…3’ 3’ …TACTGAC…5’ RNA 5’ …AUGACUG…3’ 转录：以S.S DNA为模板，在依赖DNA的RNA聚合酶的作用下…. 逆转录：….依赖RNA的DNA聚合酶… DNA聚合酶 DNA聚合酶与DNA复制 DNA复制：1 DNA复制：2 DNA复制：3 常用的DNA聚合酶： 大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ； E.coli DNA polymerase Ⅰ的Klenow片段（Klenow酶）； 耐热 DNA 聚合酶； 反转录酶 DNA聚合酶 大肠杆菌 DNA 聚合酶 Ⅰ（E.coli DNA polymerase Ⅰ）及其大片段（Klenow片段） 35KD