16 DNA重组与基因工程PPT.ppt

噬菌体：一类非细胞微生物，能高效率、特异性地侵染宿主细胞，然后自主复制繁殖（溶菌途径），或整合入宿主基因组中（溶源途径），在一定的条件下两种状态还会相互转化。 λ噬菌体DNA改造载体 λgt系列（插入型，适用cDNA克隆） EMBL系列（置换型，适用基因组克隆） M13噬菌体DNA改造载体（含lacZ基因） M13 mp系列 柯斯质粒：一类人工构建的含有λ-DNA cos序列和质粒复制子的特殊类型的载体。 其他载体 人工染色体载体：细菌人工染色体（BAC）、酵母人工染色体（YAC）、噬菌体人工染色体（PAC）、哺乳动物人工染色体（MAC）、人类人工染色体（HAC） 动物病毒DNA改造的载体 二、基因工程的基本过程 分、切、接、转、筛、用 重组DNA技术操作的主要步骤 载体 质粒 噬菌体 病毒 目的基因（外源基因） 基因组DNA cDNA 人工合成 PCR产物 限制酶消化 开环载体DNA 目的基因 连接酶 重组体 转化 体外包装，感染 带重组体的宿主 筛选 表型筛选 酶切电泳鉴定 菌落原位杂交 1、“分”：目的基因及载体的制备 载体的制备： 克隆载体（cloning vector）：用于目的基因的克隆、扩增、序列分析和体外定点突变等。 表达载体(expression vector)：用于在宿主细胞中表达外源目的基因，获得大量表达产物。 分离基因的方法：化学合成、PCR、