淀粉酶米氏常数测定1.pptxVIP

一、 实验目的 ;二、 实验原理 ;以1/v对1/[S]作图，可得一条直线，所得直线的截距是1/Vm，斜率为Km/ Vm。通过Lineweaver-Burk作图法作图后可方便的求出Km值。;试管 移液抢 秒表 吸耳球 恒温水浴锅 7200型分光光度计。;三 仪器和试剂;（5）0.02mLpH6.0磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲液 称取磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)45．23g和柠檬酸(C6H8O7·H2O)8.07g，用蒸馏水溶解，用酸度计或pH试纸校正pH，定容至1000 mI。 （6）0.2moL/L HCl 取36%盐酸（饱和浓盐酸）0.86ml加入已加有少量蒸馏水的50ml容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀即可。 ;四、实验操作 ;; 不同底物(可溶性淀粉)浓度（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%）可溶性淀粉4mL，缓冲液0.75mL，摇匀后，在60℃水浴中平衡5 min，加入0.25 mL稀释好的酶液，立即记时，充分摇匀，准确反应10 min，立即加入3.0ml的0.2moL/L HCl终止反应，然后立即取出1.00ml溶液置于5.00ml稀碘液显色，摇匀，并以稀碘液作对照，于660nm处测定吸光度（按操作表2操作）。;; 酶的反应速度V：以单位时间内吸光度的减少量d(A0-A1)／dt来表示 以1/v 对1/[S]双倒数