ch03细胞工程实验室及常用仪器设备PPT.ppt

Chapter 3 细胞工程实验室及 常用仪器设备;Section 1 实 验 室 设 置;细胞工程实验的基本需要 实验准备 包括培养基配制、器皿洗涤、培养基和器皿灭菌等 无菌操作 控制培养;一、实验室组成 1.基本实验室 准备室：准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作，要求宽敞明亮，通风条件好;准备工作 器皿的洗涤 培养基的配制与分装 培养基和器皿的灭菌 组成 洗涤区 灭菌区 贮藏区 培养基配制区;接种室;培养室 对离体材料进行控制条件下的培养 基本要求是能够控制光照和温度，保持相对无菌的状态 温度：25～27℃（植物），35～37℃（动物） 光照强度：2000～3000 lx 配置适宜的培养架 对于某些精细培养类型（如细胞培养和原生质体培养等），也可采用光照培养箱或人工气候室代替培养室;培养室;智能人工气候箱;2.辅助实验室 细胞学实验室 对培养材料进行细胞学鉴定和研究 由制片室和显微观察室组成 要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染 ;细胞实验室;生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查 大型的次生产物生产实验室，还应建立有效物质分离实验室;3.细胞工程实验室布局 便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察 可根据细胞工程实验的操作程序安排 接种室、培养室应放在与外界环境的隔离的区域 灭菌室应与接种室相邻 ……;细胞工程实验室布局示意图;细胞工程实验室;Section 2 仪器设备;1、基本设备;⑵冰箱 用于各种维生素和激素类药品及培养基母液的保存或某些实验材料的低温处理 需1～2台，有时需用到超低温冰箱（－80℃）;;⑶酸度计 用于测定培养基及其它溶液的pH 一般要求可测定pH范围1-14之间，精度0.01即可;⑷离心机 用于细胞、原生质体等活细胞分离，亦用于培养细胞的细胞器、核酸以及蛋白质的分离提取 细胞、原生质体等活细胞的分离用低速离心机 核酸、蛋白质分离用高速冷冻离心机 规模化生产次生产物，还需选择大型离心分离系统;;⑸加热器 用于培养基的配制 电炉、微波炉;⑹纯水装置 离体培养应使用符合试验要求的纯水或蒸馏水 蒸馏水器 纯水机;蒸馏水器;超纯水机;2.灭菌设备 ⑴高压蒸汽灭菌锅 手提式 立式 卧式 ⑵干热消毒柜（干热灭菌烘箱） ⑶过滤灭菌装置 ⑷喷雾消毒器 ⑸紫外灯 ;;干热消毒柜;3. 无菌操作设备 ⑴超净工作台（净化工作台） 通过空气过滤去除微生物和灰尘颗粒来达到净 化目的的装置 由鼓风机、滤板、操作台和照明灯等部分组成 单人式和双人式 侧流式和平流式 ⑵接种箱;超净工作台;接种箱;4.培养设备 根据需要所选用的不同规格和控制精度的用于细胞、组织或器官培养的设施和设备 培养架 培养箱 摇床（或振荡培养箱） 生物反应器;;光照培养箱箱;摇床;振荡培养箱;生物反应器;5. 光温控制设备 照度计、时间程序控制器、空调及温度感应器;光学显微镜（ Light microscopy） 典型的动植物细胞直径在数十微米，比人眼最小颗粒还小5-10倍，只有借助于显微镜才可以观察到细胞内部结构 分辨率 人眼：R=100μm 光学显微镜：R=0.2μm;⑴荧光显微镜（Fluorescence Microscope） 利用强烈的经过滤光镜过滤的激发光线，激发标本产生荧光 特点：染色简便，标本呈彩色图案、明亮，灵敏度比较高;荧光显微镜;⑵相差显微镜 细胞各结构的密度不同，通过致密部分的光线速度小，与通过邻近部分的光线产生相位偏差或光程差，这种差异是人眼不可分辨出来的，显微镜利用光的衍射和干涉特性，把经过不同区域的光线的相差转化为振幅差（明暗差）， 使细胞各结构之间呈清晰对比。可以观察活细胞，可以在镜下连续拍摄;⑶体视显微镜及图像分析系统 ;⑷共聚焦激光扫描显微镜 （Confocal） 它是在荧光显微镜成像的基础上加装了激光扫描装置，利用计算机进行图像处理，使用紫外或激光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光三维图像，观察细胞的形态变化或生理功能的改变 ;⑸显微注射系统（ Programmable Microinjector） 可以将任何类型的分子或者分子结合物注射到细胞的细胞质和细胞核中去。例如，RNA，DNA，蛋白质，抗体，标记染料，人工合成的分子，多肽，以及所有的细胞器都可被注射;电子显微镜 电子的波长比光短，因而用电子代替光可以大大提高显微镜的分辨率，电子运动快，波长较小（如10万伏加速的电子，波长为4×10-3nm） 电子显微镜分辨率≤2×10-3μm，分辨力比普通光学显微镜高