专题1 基因工程上课PPT.pptVIP

专题1 基因工程 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的生物类型和生物产品。 一、基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的生物类型和生物产品 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基本工具： 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 二、 DNA重组技术的基本工具 黏性末端 黏性末端 黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的 核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(6个,4、5、8个) 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 4000种。 （1）来源： （2）种类： （3）作用： （4）结果： 形成两种末端 黏性末端 平末端 1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”（小结） 3、基因进入受体细胞的运载体——“分子运输车” （1）运载体的作用 作为运载工具，将外源基因(抗虫基因)转移到受体细胞(棉花细胞)中去。 利用运载体在受体细胞(棉花细胞)内，对外源基因(抗虫基因)进行大量复制。（随载体的复制而复制） （2）作为运载体必须具备的条件 能够在宿主细胞中自我复制并稳定地保存。 具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 具有某些标记基因，便于进行筛选。 必需是安全的，不会对受体 细胞有害。 大小应适合，便于提取和操作 （3）常用的运载体 3、基因进入受体细胞的运载体——“分子运输车” 细菌细胞质的质粒 λ噬菌体的衍生物 动植物病毒 注意：真正用作运载体的质粒都是人工改造过的。 （补充知识）基因的结构 1、原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 ②转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 ③转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 原核细胞的基因结构 能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质 编码区 非编码区 ①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。 ②有调控遗传信息表达的核苷酸序列，在该序列中，最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。 启动子 2、真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 内含子： 外显子： 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 启动子与起始密码 启 动 子 起 始 密 码 位 置 DNA上基因的非编码区，在编码区上游段（左侧） 位于mRNA上的开始即单链信使RNA （转录产物） 功 能 转录时与RNA聚合酶结合，对转录mRNA起调控作用。 是翻译的开始，是肽链延伸的第一个氨基酸的位点。 二、基因工程基本操作的四个步骤 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 （一）目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 2、获取目的基因的常用方法 （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 未知序列 已知序列 （1）从基因文库中获取目的基因： 基因文库: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library) 基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库. ① 概念：PCR全称为_______________，是在生物____复制___________的核