仪器流式细胞仪(术)2010PPT.ppt

淋巴细胞亚群与疾病 疾 病 CD3 CD4 CD8 CD4/CD8 NK 自身免疫性疾病 系统性红斑狼疮 类风湿性关节炎 自身免疫性溶血性贫血 重症肌无力 免疫缺陷病 爱滋病 病毒感染 传染性单核细胞增多症 慢性活动性肝炎 活动性肝硬化 肿瘤 消化道癌, 肝癌, 肺癌 再生障碍性贫血 粒细胞减少症 淋巴细胞亚群检测意义 疾病机理研究 疾病辅助诊断 移植后免疫检测 治疗方案的确定及疗效评价 CD25高于正常值5-10%, 表明即将或已发生排斥 CD4/CD8比值下降提示并发凶险感染 0.2时, 必须停用免疫抑制剂 CD2+HLA-DR+增加5-10%, 且不伴有CD25的增加, 提 示巨细胞病毒感染 慢性疲劳, 感染后综合征, 纤维肌痛, 类风湿性关节炎, 过敏等 疾病预防 淋巴细胞亚群检测意义 　 Control （n=20) Active SLE (n=17) Stable SLE (n=13) CD3 70.4± 5.87 65.8± 10.9 68.5± 8.95 CD4 35.0± 5.70 22.1± 4.15** 34.5± 4.23 CD8 27.9± 5.73 45.7± 9.58** 32.7± 9.01 CD4/CD8 1.27± 0.14 0.43± 0.12** 1.05± 0.26* NK 17.8± 5. 48 4.37± 3.31** 7.59± 5.01** 鉴别活动期和非活动期SLE Th1/Th2细胞 PMA+Ionomycin 刺激4-6hr Traditional Cytokine Flow Cytometry IL-2 Phycoerythrin CD4 FITC Antigen Specific Cytokine Flow Cytometry CD69 PE anti-TNF? FITC FCM细胞因子染色步骤 细胞经4-8小时培养。 每管加2ml红细胞裂解液，避光10分钟，1000r/分 离心5分钟，弃上清。 加2mlPBS缓冲液洗1次离心，弃上清。 每管加单抗20ul，室温避光15分钟。2ml缓冲液洗1次。1000r/分离心5分钟，弃上清。 每管加4%多聚甲醛500ul，固定20分钟。1000r/分，离心5分钟弃上清。 FCM细胞因子染色步骤 每管加0.1%皂素的PBS2ml破膜10分钟，1000r/分离心5分钟，弃上清。 每管加抗细胞因子单抗0.2ul，室温避光孵育30分钟。2ml含0.1%皂素PBS洗1次，1000r/分，离心5分钟，弃上清。 每管加500ulPBS/2%多聚甲醛悬浮细胞，上机检测。 *细胞培养需加入 刺激剂：PMA：ionomycin 蛋白转运抑制剂：Monensin Th1/Th2失衡相关疾病 嗜曙红细胞增多和IgE升高相关疾病 Ommen’s Syndrome(Ommen’s综合征) Hyperosinophilic Syndrome(高嗜曙红细胞综合征) Kimura’s Disease(Kimura’s疾病) Well’s Syndrome(Well’s 综合征) 传染病 病毒性疾病 人类免疫缺陷性病毒感染和爱滋病(AIDS) 麻疹 呼吸道合胞体病毒感染 慢性活动性乙型肝炎病毒感染 分枝杆菌和其它细菌感染 麻疯病 肺结核 鸟结核分枝杆菌复合感染 细胞内细菌感染 滑膜炎反应性关节炎 淋病和梅毒 Th1/Th2失衡相关疾病 寄生虫病 原寄生虫感染：皮肤和内脏利什曼病 蠕虫病：丝虫病和血吸虫病 真菌性疾病 过敏性支气管肺霉菌病 念珠菌病 隐球菌病 类球孢子菌病 芽生菌病 球孢子菌病 组织胞浆菌病 恶性肿瘤 皮肤基底细胞和鳞细胞癌 Sezary Syndrome (Sezary综合征) 淋巴瘤 EBV相关的B细胞和非何杰金氏淋巴瘤 何杰金氏淋巴瘤 大细胞退行性(CD30+)淋巴瘤 多发性骨髓瘤和Castleman’s综合征 卡氏肉瘤 Th1/Th2失衡相关疾病 变应性疾病