人教-选修3-专题1-基因工程的工具和操作程序1PPT.pptVIP

基因工程的工具和操作程序 基因工程概念 基因工程就是按照人类的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫DNA重组技术。 基因工程概念理解 基因工程的别名： 操作环境： 操作对象： 操作水平： 结果： 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 赋予生物新的遗传性状,创造出人们 需要的生物类型和产品 基因工程的基本工具 分子手术刀 分子缝合针 分子运输车 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 基因进入受体细胞的载体 限制性核酸内切酶 2、作用： （1）能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列 （2）从特定部位的两个核苷酸之间切开 3、限制酶的作用原理： 催化磷酸二酯键断裂 4、作用结果： 形成黏性末端、平末端 5、用途： 切割目的基因和运载体（基因工程） 1、来源： 主要从原核生物中分离，从不同微生物中分离出了约4000种限制酶 1、DNA连接酶的作用： 2、作用原理： 3、作用结果： 4、用途： 5、种类： DNA聚合酶与DNA连接酶 连接DNA片段 催化磷酸二酯键形成 获得重组DNA分子 构建基因表达载体（基因工程） 1）E.coliDNA连接酶 2）T4DNA连接酶 DNA连接酶 黏性末端 黏性末端和平末端 2、作为运载体的必要条件： 能自我复制 有切割位点 有遗传标记基因 另外，对受体细胞无害、容易分离等 1、运载体的用途： 1）运载工具 3、运载体的种类： 细菌质粒 λ噬菌体的衍生物 动植物病毒 基因进入受体细胞的载体 2）在受体细胞携带着目的基因进行大量复制 能复制并带着插入的目的基因一起复制 切割位点 有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。 “分子运输车”——载体 基因工程的基本操作程序 一、目的基因获取 二、基因表达载体的构建 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测和鉴定 一、目的基因的获取 三种方法：从基因文库获得 利用PCR技术扩增 人工合成 目的基因： 符合人们需要的，编码蛋白质的结构的基因 a、从基因文库中获取 概念 将含有生物不同基因的多个DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因 概念理解 实质是：一细菌群体中含有这种生物的不同基因 基因文库分类 基因组文库--- 部分基因文库(cDNA文库)是--- 是含有一种生物所有的基因（理解：相当国家图书馆） 只含有一种 生物部分基因 （理解：某市 图书馆 ） mRNA反转录形成cDNA的过程大致步骤 cDNA合成过程： 第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。 第二步，酶使RNA-DNA杂交分子中的RNA链 降解，使之变成单链的DNA。 第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。 b、PCR（聚合酶链式反应）技术扩增 高温变性 低温退火 中温延伸 前提： 有一段已知目的基因的核苷酸序列 PCR（聚合酶链式反应）技术扩增 可获取大量目的基因 双链DNA分子数为2n 变性、退火、延伸、 多次重复 1、概括PCR反应的过程： 4、结果： 3、PCR反应的条件： 模板，引物，酶，原料（四种脱氧核苷酸），ATP,温控设备 2、PCR反应的原理： DNA双链复制 c 、直接人工合成 通过DNA合成仪用化学 方法直接人工合成 DNA合成仪 二、基因表达载体的构建 4、切割质粒和目的基因的限制性内切酶 是否要求一样？为什么？ 2、表达载体至少带有哪些结构？各有什 么作用？ 思考： 3、构建表达载体时需要哪些工具？ 1、这步是基因工程的核心，构建基因 表达载体的目的是什么？ 目的基因+ 启动子+ 终止子+ 标记基因 基因表达载体的构建 基因表达载体的组成： 三、目的基因导入受体细胞 1、导入植物细胞常用的方法是什么？ 原理是什么？具体过程是怎样的？ 3、导入大肠杆菌的方法是怎样的？ 钙离子有什么作用？ 2、导入动物细胞常用的方法是什么？ 基本操作程序是怎样的？ 目的基因导入植物细胞：农杆菌转化法 目的基因进入受体细胞内，在受体细胞内维持稳定和表达的过程 转化的概念： 农杆菌转化法的原理: 农杆菌易感双子叶和裸子植物，农杆菌的Ti质粒的上的T—DNA可转至受体细胞,并整合到受体细胞的染色体上 目的基因导入动物细胞 方法: 显微注射技术 基本操作程序： 首先将含有