关于蚕豆病PPT.pptVIP

年级、专业、班级：2010 级临床医学三四大班 实验课时间： 实验室： 组别： 组员排名：高吉，廖艳，宋雪，刘理东，周宇东，彭婉嫕，王文芝，王宇 报告人：王宇 阅读下列案例，根据要求回答问题并设计实验进一步明确诊断。 案例： 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。 体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。实验室检查：红细胞 1.98×1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5μmol/L，结合胆红素13.7μmol/L，未结合胆红素71.8μmol/L，尿蛋白（++），潜血(+)，尿胆红素(－)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。 1.根据上述患儿的临床表现和实验室检查，初步判断患儿是何种疾病？（必答） 2.请设计实验进一步明确诊断。（必答） 要求：实验名称，实验方法，主要试剂和仪器，实验操作流程及注意事项，结果如何分析。 3. 从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果。（必答） 4. 要想探讨该病发生的分子基础，可以用哪些技术检测什么目的基因？（选答） 5. 患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？（选答） 初步判断患儿是患蚕豆病 G-6-PD/6PGD定量比值法检测红细胞G-6-PD 活性 原理：NADPH可使氢化硝基四氮唑蓝 （NBT）由浅黄色还原为紫色的甲膳。此法另设一管，将底物改为6PGD，两管所测的值相比，即可得出比值。正常值为＞1．0，≤1.0为缺乏。 实验方案 实验器材：恒温水浴箱，可见分光光度计 试剂：硝基四氮唑蓝定量法试剂盒：硝基四氮唑蓝（NBT） 1支，吩嗪甲脂硫酸盐（PMS）1支，6磷酸葡萄糖酸（6PG）溶液1瓶，葡萄糖6磷酸（G6P）溶液1瓶，脲2.5g，ACD抗凝剂。 · · 空腹抽取患儿静脉血2 ml置于含0.4mlACD抗凝剂的试管中，混匀。吸取50ul,加入1ml蒸馏水，制成溶血液备测。 取试管2支，标1、2号后分别加入溶血液0.1ml。 取反应试剂A反应试剂B各0.1ml,分别加至1、2号试管内，然后将试管置于37℃水浴箱中准确保温30min。 取出试管，立即向各管内加入终止液2.5ml。 以蒸馏水作空白对照，于650nm 波长处读取1、2号管的光密度值（S1 和S2）。 G-6-PD/6PGD=S1/S2，G-6-PD/6PGD ≤1.0，则为G-6-PD缺乏，判断为阳性；G-6-PD/6PGD＞1.0，则为G-6-PD正常，判断为阴性。 G6PD的缺陷不能提供足够的NADPH以维持还原型谷胱甘肽（GSH）的还原性（抗氧化作用），在遇到蚕豆种某种因子后更诱发了红细胞膜被氧化，红细胞膜上的磷脂分子中的不饱和脂肪酸氧化生成过氧化脂质，损害细胞膜，导致红细胞的大量破坏。 蚕豆病机制 在单核-吞噬细胞系统产生胆红素过多，超过肝细胞的摄取、转化和排泄能力，造成血清游离胆红素浓度过高。此时，血中结合胆红素的浓度变化不大，重氮反应实验（凡登白）间接反应阳性，尿胆红素阴性。由于肝对胆红素的摄取、转化和排泄增多，从肠道吸收的胆色素原增多，造成尿胆色素原增多。 实验室检查的生化代谢解释 皮肤、巩膜等组织的黄染 胆红素对含有弹性硬蛋白的组织具有较大的亲和力，所以含有该组织的巩膜、皮肤和粘膜最易出现黄疸。 黄疸加深时，尿、痰、泪液及汗液也被黄染，唾液一般不变色。尿中出现血红蛋白尿而使尿液呈酱油色。 精神萎靡似与胆盐对中枢神经系统的毒性作用有关。 呼吸急促与胆盐刺激迷走神经和抑制心脏传导有关 临床表现的解释 G6PD缺乏症的分子基础是基因突变，G6PD基因位于Xq28，由13个外显子及12个内含子组成，全长20114bp，是一典型的看家基因。 ?G6PD基因在基因组的位置，?如 G6PD基因突变具有以下特点：多为单个碱基置换的错义突变；大多数基因突变属于转化型突变，常发生在CpG二核苷酸内的C-T的转换。 分子基础