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最小重叠区 最小重叠区 最小重叠区 最小重叠区 对多个RB 患者Chr缺失鉴定，最后将RB基因定位于13q14 基因定位(Gene Mapping) 每个单倍体DNA含有3×109 bp，分布在22条常染色体和X，Y性染色体上。 编码蛋白质的结构基因大约有30,000-40，000个。 基因定位是用一定的方法将基因确定到染色体的实际位置。将不同的基因确定于染色体的具体位置之后，即可绘制出基因图（gene map）。 人类染色体的基因制图(gene mapping)： （1）物理制图(physical mapping)：是从DNA分子水平制作基因图。它表示不同基因（包括遗传标记）在染色体上的实际距离，是以碱基对为衡量标准。 megabase:百万，兆 细胞遗传图：从细胞遗传学水平，用染色体显带等技术在光学显微镜下观察，将基因定位于不同染色体的具体区带，又称区域定位，而把基因只定位到某条染色体上称为染色体定位。 基因定位的方法 一、体细胞杂交（somatic cell hybridization） 又称细胞融合（cell fusion），是将来源不同的两种体细胞融合成一个新细胞。大多数体细胞杂交是用人的细胞与小鼠、大鼠或仓鼠的体细胞进行杂交。这种新产生的融合细胞称为杂种细胞（hybrid cell）。 杂种细胞有一个重要的特点是在其繁殖传代过程中出现保留啮齿类一方染色体而人类染色体则逐渐丢失，最后只剩一条或几条。 Miller等培育出一种杂种细胞，此类杂种细胞的存活需要胸苷激酶（TK）。后来发现凡含有人第17号染色体的杂种细胞都因有TK活性而存活，反之则死亡。从而推断TK基因定位于第17号染色体上。这是首例用细胞杂交法进行的基因定位。 鼠 人 X TK- HPRT+ TK+ HPRT- 鼠 人 鼠 人 鼠 人 TK+ HPRT+ 17 3 17 3 17 3 TK+ TK+ TK- HAT TK, 胸苷激酶 HPRT, 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶 HAT，次黄嘌呤，氨基蝶呤，胸苷 微细胞（microcell）技术：将含有一条正常Chr的微细胞与肿瘤细胞融合，可抑制肿瘤，这为寻找肿瘤抑制基因提供线索。 二、克隆嵌板法（clone panel method ） 应用杂种细胞保留或丢失人类染色体有时有重叠现象而设计的一种简便有用的基因定位方法。 克隆嵌板 杂种克隆 保留的人染色体 1 2 3 4 5 6 7 8 A + + + + - - - - B + + - - + + - - C + - + - + - + - 半乳糖激酶（GK）、尿苷-磷酸激酶（UMPK）和氨基己糖苷酶A（HEXA）的基因就是用此法分别定位于人的17号、1号和15号染色体上的。 三、染色体原位杂交 （chromosome in situ hybridization） 是分子杂交技术在基因定位中的应用，也是一种直接进行基因定位的方法。 四、连锁分析 (linkage analysis) 在减数分裂时，一对同源染色体上的两个相邻的基因可发生交换，距离较远，发生交换的机会较多，则出现基因重组；若两者较近，重组机会较少。 一些相互邻近的基因或遗传标记趋向于在一起共同遗传或相互连锁构成单体型(haplotype)。 gene 1 gene 2 基 因 连 锁 利用某个拟定位的基因是否与某个遗传标记存在连锁关系，就能将该基因定位到染色体的一定部位。 在人类基因组中存在大量的微卫星(microsatellite)标记和单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)标记。 有足够数量的家系。 当比较两个随机个体的7号染色体上的一段DNA序列时， 在2200个核甘酸中出现两个单核甘酸多态性(SNP)位点。 人基因组中，平均约每1200个碱基就会有一个碱基的不同。 单核甘酸多态性(SNP)标记 （a）在多个个体的DNA样品中鉴定单核苷酸多态性（SNPs）； （b）将群体中频率大于1%的那些共同遗传的相邻SNPs组合成单体型； （c）在单体型中找出用于识别这些单体型的标签SNPs。通过对图中的三个标签 SNPs进行基因分型，研究者可以确定每个个体拥有图示的四个单体型中的哪一个。 微卫星DNA标记 简短串联重复(short tandem repeat, STR)。 1-4个碱基的重复,如(A)n,(CA)n,(CAG)n和 (CATG)n。 微卫星DNA数量多且均匀分布在基因组中。据估计，在基因组中平均30—50kb就存在一个微卫星。 微卫星DNA具有丰富的多态性。 PCR方法对个体进行微卫星(CA repeat)多态性分型 PCR或DNA复制过程中的链滑(strand slippa