基因工程第5章 目的基因的获得PPT.ppt

二、 序列克隆法 根据已知基因序列或同源基因序列分离目的基因 采用核酸探针杂交筛选或用PCR技术进行分离 已知基因序列 已知目的基因的DNA全部或部分DNA序列 已知其它物种的同类基因的DNA序列（功能可能已知） 已知目的基因cDNA全部或部分序列 EMBL GenBank DDBJ 世界生物信息三大数据库 /Web/Genbank/ http://www.ebi.ac.uk/embl.html http://www.ddbj.nig.ac.jp PCR法 目的序列已知： 提取基因组DNA作模板 根据目的基因序列设计引物 PCR扩增 适合扩增原核生物基因 RT－PCR法 目的序列已知： 以反转录合成的cDNA第一链为模板，设计合成一组引物，用PCR扩增技术获得多拷贝双链cDNA 适合扩增真核生物基因，研究不同时期或不同发育阶段基因表达的变化 原核生物不易得到mRNA，也不含有polyA尾。 PCR克隆省时，简单 要求待扩增的DNA片段的序列已知，至少已知DNA片段两端20bp的序列 有效地设计引物（添加合适的酶切位点） 常规PCR，长度1kb，扩增效率高 长度1kb，PCR扩增效果降低 三、差别杂交法 适用范围： 组织特异性表达或特定发育阶段表达的基因 受生长因子调节的基因 经特殊处理诱导表达的基因 应用前提：基因在两种不同的细胞群体中的差异性表达（一个细胞群体中