复习专题1《基因工程》PPT.ppt

３、蛋白质工程的基本途径 预期的蛋白质功能 设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列 找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因） 4、蛋白质工程的概念 是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 基因工程专题复习 基因工程的基本操作程序 基因工程的基本操作程序主要包括 四个基本步骤： 1）目的基因的获取 2）基因表达载体的构建 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 (一)目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的结构基因 （二）获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 1、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库. 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） （1）基因文库 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：___________、_______________、___________ 、 ___________ . ②原理：__________ 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA双链复制 模板DNA 四种脱氧核苷酸 引物 热稳定DNA聚合酶 2.利用PCR扩增目的基因 ④过程 a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 3.人工合成 ——根据已知的氨基酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 二、基因表达载体的构建——核心 质粒 目的基因 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 表达载体 同一种 1.过程 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并 遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？ 2、基因表达载体的作用 3.基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是mRNA结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 三、将目的基因导入受体细胞 1、将目的基因导入植物细胞 ①农杆菌转化法 ②基因枪法 ③花粉管通道法 2、将目的基因导入动物细胞 显微注射技术：将基因表达载体提纯，用显微仪 注射到受精卵中 3、导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 ②方法： 四、目的基因的检测与鉴定 检测 ①导入检测：目的基因是否导入受体细胞 方法—— DNA分子杂交技术 ②表达检测 转录检测——分子杂交 翻译检测——抗原抗体杂交 分子检测法 鉴定 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定等 个体水平的鉴定 1．多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的 技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模 板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合） →72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列 有关PCR过程的叙述中不正确的是（ ） A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也 可利用解旋酶实现 B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配 对原则完成 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高 C 2. 在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核 苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460 个），放入DNA扩增 仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷 酸的个数是 A．540 个 B．7560个 C．8100 个 D．17280 个 C 3.天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用