大规模动物细胞培养技术PPT.ppt

1、细胞截留问题。目前工业上用的细胞截留方法主要有三种：旋转过滤、平板错流过滤和中空纤维过滤。对旋转过滤来说，过滤网孔大了，细胞会漏掉；过滤网孔小了，网孔会被细胞堵住。平板错流过滤和中空纤维过滤很容易被堵住，一般最多5天就会堵住。不仅麻烦，而且过滤的相关耗材也不便宜。 2、倍增时间长,生产周期长:严格的无菌控制,完善的控制模式,灵活的补料及收获的方式及策略,很少的额外操作时间： 3、对剪切力敏感： 特殊的通气系统 ，特殊的搅拌系统， 蠕动泵传输细胞及培养基 4、代谢废物：氨、乳酸、CO2，细胞碎片 BBI灌注培养系统，包括反应器，无泡通气，低剪切力搅拌浆，细胞截留装置－旋转过滤器，收获泵，补料泵，液位电极等 1/we distinguished between different particle classes. From the lower measuring limit of 3.4um to the upper limit of 90 um the classes were distinguished as follows: 3.4 to 6 um debris; 6 to 10 um dead cells; 10 um living cells and aggregates. Particles of 6 to 50 um represent the total cell number. 2/选择过滤器孔径的原则是保证活细胞保留在生物反应器内，细胞碎片，死细胞通过过滤器分离。保证反应器内最好的细胞生长状态。 宝信捷生物应用设备有限公司 BIO-MEN BIOSYSTEMS CO.LTD. 大规模动物细胞培养技术 Sartorius BBI Systems (B.Braun Biotech International GmbH)德国赛多利斯BBI系统（贝朗国际生物） sdsdsds The Cell bacterial cell mammalian cell Cellwall Ribosome Cytoplasm Genome Plasma membrane Ribosome Cytoplasm Nucleus Mitochondrion Golgi apparatus Endoplasmic Reticulum 细菌与细胞的结构 大规模细胞培养需要解决的问题 工艺优化：温度，pH，O2，营养成分（葡萄糖、谷胺酰胺） 动态补料工艺、培养基成份的优化 排除代谢废物：氨、乳酸、CO2，细胞碎片，死细胞 防止染菌：接种、补料、取样、收获 解决剪切力问题：低剪切力搅拌，无泡通气 复杂的过程监控：溶氧：搅拌，Air, O2, N2 级联控制 pH ：CO2，补料（Na2HCO3）级联控制 补料：液位，收获级联控制 接种：无菌输送 营养成份 杂交瘤细胞培养时使用的血清中的各种蛋白是单抗纯化的主要障碍 杂交瘤细胞的无血清培养基通常是在标准的基础培养基中添加小分子和大分子物质，以代替血清的各种功能。最常用的基础培养基有RPMI 1640，F12，IMDM，DMEM?F12，DMEM?F12?RPMI 1640 无血清培养基用于杂交瘤细胞培养有它的固有优点，也有它的不可避免的缺点，如需要对每个细胞系优化配方， 添加成本很高的激素和生长因子，导致长的迟滞期，降低细胞生长速率、最大细胞密度和细胞活性等 逐渐形成了以胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺、亚硒酸钠为基础添加剂的各种无血清培养基配方，进而通过合理解决铁离子的传递问题，开发出了无蛋白培养基 胰岛素是杂交瘤细胞的重要生长因子，能够刺激葡萄糖的利用及RNA、蛋白和磷脂的合成 转铁蛋白是一种结合铁的糖蛋白，在无血清培养基中是一种重要的生长刺激蛋白 乙醇胺是一种重要的刺激细胞生长的化合物，与细胞内的磷脂合成有关 亚硒酸钠中的硒作为一种微量元素，是一种谷胱甘肽过氧化物酶的辅因子，拥有抗过氧化物的能力，因而可提高杂交瘤细胞在无血清培养基中的生长速率及活性 多数细胞系需要脂类维持在无血清培养基中生存，常见的添加脂类为胆固醇、低密度脂蛋白、大豆磷脂和亚油酸或油酸 所需微量元素：铁、硒、铜、铝、锰、钒、锌等；无蛋白条件下长期培养往往还需要添加铷、锆、铬、镉、钴、镍、硅、锡、锗等 无血清培养基中常见的其他添加物质包括：?-巯基乙醇、氢化可的松、维生素C、生长因子和抗氧化剂等 营养成份－其他需要注意的要点 提高培养细胞的接种密度； 选择合适的抗流体剪切保护剂，在含血清培养时选用的保护剂未必在无血清培养时适用； 选择合适的生物反应器，使剪切作用更小，控制精度更高； 添加更丰富