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实验一 DNA 显示和细胞有丝分裂相的观察 核酸是生物最重要的组成成分,核酸分为两大类, 即脱氧河塘核酸(DNA)和核糖核酸 (RNA) 。它们在细胞内的分布及化学性质均有所不同。DNA 主要分布在核的染色质或有丝 分裂过程中出现的染色体内。RNA 分布在细胞质和核仁内。但在染色质及染色体中也含有 少量的 RNA ，核仁中也有少量的 DNA 。在线粒体，叶绿体等细胞器内除含有 RNA 外，也 含有少量的 DNA 。 一、 目的与要求 了解Feulgen 反应的基本原理，学习其操作 方法和压片法，初步掌握细胞分裂各期的主要特 点。 二、 原理 Feulgen 反应的原理是根据 DNA 经弱酸 （1mol/L）水解后，打开料嘌呤和脱氧核糖 连接的键，在脱氧核糖的一端形成有离的醛 基。这些醛基就在原位与 Schiff 试剂结合， 形成含醌基（ ）的化合物，醛基是 一个发色团所以具有颜色，因此凡有 DNA 的部位，就呈现紫红色。 三、 实验内容 1．DNA 的显示法-Feulgen 反应 2 ．压片法 3 ．细胞有丝分裂相的观察 四、 实验步骤 （一） DNA 的显示法-Feulgen 反应 以蚕豆根尖或洋葱根尖为材料,进行 Feulgen 反应的具体操作程序如下: 切取根尖 ↓ 长度 0.3-0.5cm Camoy 固定剂 ↓ 固定 10-30 分钟 95%酒精 ↓ 10 分钟 70%酒精 ↓ 10 分钟 蒸馏水 →(对照) 5%三氯醋酸 o ↓ ↓90 C 15 分钟 1mol/L HCl ← 蒸馏水 ↓ 室温 1mol/L HCl ↓ 60 oC 8 分钟 Schiff 试剂 ↓ 40 -60 分钟 亚硫酸水(1,2,3) ↓ 换 3 次,每次 5 分钟 自来水 ↓ 将染色后的根尖漂洗干净,悬着染色效果好的材料 蒸馏水 ↓ 压片 ↓ 镜检 (二) 压片法 压片的操作步骤如下,把根尖放在载片上,用刀片切取根尖(0.3cm),纵切根尖,加一滴水,用解剖 针将根尖纵向分成若干小条,保留 1-2 小条,加盖玻片,用铅笔端轻轻敲击盖玻片,使细胞分离、 压平呈云雾状。 （三） 蚕豆（或洋葱）根尖压片的观察 首先在低倍镜下，区分根尖的分生组织区及延长组织区的细胞，然后，在高倍镜下，观 察细胞核的形态，注意在你的片子上，是否有有丝分裂细胞，如有，你能找到细胞分裂 期的几个阶段，其特征如何？（可参照附录） （四） 做Feulgen 反应时，应注意的几个问题 （1） 固定剂的选择：一般常选用Carnoy 固定液。其他的固定剂如Flemming 固 定剂及 Champy 固定剂等均可用，但不能使用Bouin 固定剂。 （2 ） 水解时间：水解时间一定要合适，不宜过长或不足，否则会影响实验结果。 如用 Carnoy 固定液固定的材料，水解时间一般在 8－15 分钟之间。水解时 间的长短要随不同的材料及不同的固定剂而定。 （3 ） Schiff 试剂的质量：在做 Feulgen 反应时，一个重要的成功因素就是 Schiff 试剂的质量问题。实验时，要注意试剂颜色是否正常、有无 SO2 的气味。 （4 ） 洗涤剂的重要性：漂洗时，所用的亚硫酸水，最好在每次实验前临时配制，